‘王族’海棠酚类化合物提取工艺优化及抑菌活性分析

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海棠是我国著名的春季观赏树种,其叶片含有丰富的酚类活性物质。目前我国园林绿化中对海棠叶片的处理方式大多为燃烧或丢弃,探明海棠叶片中酚类物质的提取工艺及其抗氧化、抑菌和防锈病特性对于其生产种植、加工利用等具有重要意义。本研究以‘王族’海棠为试验材料,采用响应面法优化叶片酚类化合物的提取技术,通过高效液相色谱法对酚类化合物进行鉴定和定量分析,在此基础上,探究海棠叶片的体外抗氧化活性及其对食源性细菌的抑制效果,研究多酚抑制植物源真菌孢子萌发的机理,同时筛选适用于多酚胁迫下的内参基因。研究结果如下:(1)响应面优化试验分析得到‘王族’海棠叶片多酚提取的最佳条件为:甲醇浓度79%,料液比1:23 g/m L,提取时间39 min,提取次数2次,该工艺优化条件下‘王族’海棠叶片中总多酚提取量的预测最大值为30.50 mg/g,验证该条件下多酚提取量平均值为30.37±0.11 mg/g。(2)高效液相色谱鉴定结果表明,‘王族’海棠叶片多酚提取液中检测到14种物质。其中,矢车菊素为海棠叶片中主要的成色色素。(3)抗氧化试验结果表明,‘王族’海棠叶片多酚提取物有较强的清除DPPH、ABTS自由基能力,且对铁离子也有一定的还原能力,其体外抗氧化活性较好。(4)抑菌试验结果表明,海棠叶片多酚对大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为3.00、0.70、0.50 mg/m L,最小杀菌浓度为3.40、1.00、0.80 mg/m L,对革兰氏阳性菌的抑制效果优于革兰氏阴性菌。(5)冬孢子萌发抑制试验结果表明,连续培养12h后2.50 mg/m L多酚提取液组中萌发抑制率达到47.55±3.95%,说明海棠叶片多酚对植物真菌的抑制活性良好。内参基因筛选结果表明,多酚胁迫下ARF1和EF1可作为合适的内参基因进行定量研究。
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