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目的:观察由Cx43组成的缝隙连接(gap junction,GJ)在耐顺铂睾丸癌细胞侵袭转移中的作用。方法:利用浓度递增法逐步诱导耐药细胞株I-10/DDP,用不同浓度的顺铂(0,2,4,8,16,32,64,128μM)分别作用小鼠睾丸癌敏感株(I-10)和小鼠睾丸癌耐顺铂耐药株(I-10/DDP)24 h后采用MTT法测定细胞存活率,计算耐药指数。1.采用Western blotting法检测I-10和I-10/DDP中耐药相关蛋白:多药耐药蛋白1(MDR1)及P-糖蛋白(P-gp)的表达。2.免疫荧光法检测I-10和I-10/DDP细胞膜Cx43的表达。3.荧光示踪法(Parachute)检测细胞间荧光传递功能(即GJ功能),以及工具药改变GJ功能后对GJ功能的调控作用。4.采用si RNA干扰的方法下调Cx43的表达;用过表达的方法上调Cx43的表达。5.采用Transwell法检测I-10和I-10/DDP的侵袭转移能力,以及工具药直接调控改变GJ功能与干扰和过表达Cx43间接改变GJ功能后细胞的侵袭转移能力。结果:1.耐药株的建立I-10/DDP的IC50为84.171μM,I-10的IC50为21.451μM。耐药指数RI为3.924;耐药细胞中耐药相关蛋白MDR1及P-gp表达显著高于正常I-10细胞。结合以上两个结果表明:I-10/DDP对顺铂产生了获得性耐药。2.细胞膜Cx43的表达与I-10相比,I-10/DDP细胞膜Cx43的表达量显著降低。3.GJ功能与I-10相比,I-10/DDP细胞间的GJ功能明显降低(*P<0.05)。4.侵袭转移能力与I-10相比,I-10/DDP细胞的侵袭转移能力明显增强(**P<0.01)。5.调控GJ功能对侵袭转移的影响10μM RA增强GJ功能,25μM Oleamide降低GJ功能。RA抑制细胞的侵袭转移能力(*P<0.05;**P<0.01),Oleamide增强细胞的侵袭转移能力(*P<0.05)。6.分子生物学方法调控Cx43表达对侵袭转移的影响沉默Cx43可明显增强细胞的侵袭转移能力(*P<0.05)。过表达Cx43可明显抑制细胞的侵袭转移能力(*P<0.05)。结论:1.Cx43表达量降低可能与睾丸癌I-10对顺铂获得性耐药的产生有关;2.Cx43组成的缝隙连接可抑制睾丸癌耐药株I-10/DDP细胞的侵袭转移能力。