小麦CPK2基因在小麦-叶锈菌体系中的表达分析及下游蛋白的筛选

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CDPKs即钙离子依赖蛋白激酶,是植物细胞应对各种生物和非生物胁迫过程中承接Ca2+流变化的重要因素。本实验室前期工作通过SSH技术对小麦与叶锈菌互作不亲和及亲和组合在接种后早期的差异表达基因进行了富集及筛选,发现小麦CPK2基因在不亲合组合接种后8h被诱导表达。在此基础上,本试验利用RT-PCR和Western-blotting技术分别在mRNA水平和蛋白质水平对不同亲和性组合中叶锈菌侵染后不同时间CPK2的表达特征进行了检测。结果表明,在不亲和组合中小麦CPK2无论在mRNA水平还是蛋白质水平在接种后4h表达量均开始上调,8h达到最大。而亲合组合mRNA水平在接种后8h略有增加,但水平显著低于不亲和组合,之后又趋于下降并接近Oh水平;蛋白质水平在接种后8h有上调表达,在16h达到最大,但其表达量明显低于不亲和组合。可见,小麦CPK2在不亲和组合中的诱导表达要比亲和组合早且表达量高。这暗示着CPK2可能参与了小麦抗叶锈防卫反应的诱发过程。在此基础上,本试验进一步以TaCPK2激酶区(TaCPK2K)构建诱饵载体,用MatchmakerLibraryConstruction&ScreeningKits在小麦受叶锈菌侵染后构建的酵母双杂交cDNA文库中寻找与TaCPK2K发生蛋白-蛋白相互作用的基因,得到了4个阳性克隆。经测序分析,其中一个阳性克隆为smallheatshockprotein。   以上结果为进一步研究和探讨TaCPK2在小麦与叶锈菌互作过程中的作用机制奠定了试验基础。
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