PEF结合酶法提取鲍鱼脏器粗多糖及其抑菌、免疫活性研究

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近年来,随着科学水平地不断提高与创新,人们的生活水平也有了很大地提升,并且国内外的鲍鱼养殖业也得到了迅速地发展;越来越多的人买得起鲍鱼,鲍鱼的消费市场大了,其产品的多元化也逐渐发展起来,随之有大量的鲍鱼内脏出现。鲍鱼内脏中含有丰富的营养物质,如多糖、蛋白质、氨基酸及微量元素等。本论文以鲍鱼脏器作为实验材料,采用高压脉冲电场(Pulse Electric Field,PEF)结合酶法提取鲍鱼脏器粗多糖,确定了鲍鱼脏器粗多糖最佳提取工艺,测定了鲍鱼脏器粗多糖干粉中几种成分的含量,初步研究了鲍鱼脏器粗多糖对几种常见病原菌生长的抑制效果和对正常小鼠、免疫抑制小鼠免疫功能的影响。主要研究成果如下:1.研究了经PEF处理对鲍鱼脏器粗多糖提取含量的影响,结果表明当电场强度为30Kv/cm,脉冲数为12个时,可以提高鲍鱼脏器粗多糖的提取效果。2.比较了三种蛋白酶提取鲍鱼脏器粗多糖的效果,结果表明中性蛋白酶为最佳蛋白酶。3.研究了PEF结合中性蛋白酶的最佳工艺条件,最佳的酶解工艺参数为:酶解时间2.5h,料液比1:6,加酶量2.4×10~4U/g,酶解温度55℃。4.测定了鲍鱼脏器粗多糖干粉中几种成分的含量,结果表明鲍鱼脏器粗多糖干粉中多糖含量为60.39%,水分含量为10.94%,脂质含量为6.02%,蛋白质含量为17.88%,重金属镉含量为0.40mg/Kg。5.实验采用圆形滤纸片法研究了鲍鱼脏器粗多糖对11种病原菌的抑制作用。实验结果表明鲍鱼脏器粗多糖对沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)、大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)都具有明显的抑制作用,且其对沙门氏菌的抑制作用最强;而其对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp. Vasinfectum)、青霉(Penicillium)、柑橘绿霉(Penicillium digitatum)、玉米青枯病菌(Fusarium graminearum Schw.)、稻瘟病菌(Pyricularia oryzae Cav.)均无明显的抑制作用。6.采用2倍稀释法研究了鲍鱼脏器粗多糖对5种细菌的最小抑菌浓度(minimuminhibitory concentration,MIC)。结果表明鲍鱼脏器粗多糖对金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的最小抑菌浓度均为50mg/ml,对沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)的最小抑菌浓度为12.5mg/mL。7.通过体内给药的实验方法设置了空白对照组,鲍鱼脏器粗多糖低、中、高剂量(200,400,600mg/Kg)组,研究考察了鲍鱼脏器粗多糖对正常小鼠的器官指数(包括了脾脏指数及胸腺指数)、迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH)、外周血白细胞数(white blood cells,WBC)的影响,结果表明鲍鱼脏器粗多糖对正常小鼠的以上3个指标方面的免疫功能影响效果不明显。8.通过体内给药的实验方法设置了空白对照组,环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)模型组,鲍鱼脏器粗多糖低、中、高剂量(200,400,600mg/Kg)+环磷酰胺处理组,研究考察了鲍鱼脏器粗多糖对免疫抑制小鼠的器官指数(包括了脾脏指数及胸腺指数)、DTH、WBC、碳粒廓清能力的影响。结果表明鲍鱼脏器粗多糖可以显著升高免疫抑制小鼠的器官指数、DTH和WBC及碳粒廓清能力,且这些指标的结果与模型组相比较,都具有统计学意义(P<0.05或者P<0.01),鲍鱼脏器粗多糖对免疫抑制小鼠的以上4个指标方面的免疫功能都具有一定程度的增强促进作用。
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