论文部分内容阅读
开展我国黑木耳主要栽培菌株分子指纹分析研究,客观评价我国黑木耳栽培菌株种质资源的遗传多样性,掌握不同栽培菌株的鉴别方法,是充分保护和利用黑木耳种质资源,开展黑木耳良种选育,保护黑木耳品种知识产权,加强黑木耳菌种质量管理的基础。本研究从全国范围内收集了黑木耳34个主要栽培菌株,应用同工酶技术和DNA标记技术(ISSR、SCAR和SRAP)进行了栽培菌株分子指纹分析。主要研究结果如下: 1.34个供试栽培菌株的酯酶同工酶分析结果,共检测到了113条酯酶同工酶谱带,各个菌株具有2~6条不等的酶带数,多数为2~4条,共有20个酶谱类型,其中部分菌株之间的酶谱相同。聚类分析结果,在71%的相似水平时,供试的34个菌株可以归为3大类。部分菌株之间相似系数甚至为1.0,显示它们亲缘关系很近,这些菌株可能为同物异名,需要从多个方面予以比较鉴别。 2.在对扩增体系进行正交优化的基础上,应用筛选出的13个多态性引物对34个菌株基因组进行PCR扩增,共产生129条DNA带,96.9%呈现多态性,平均每个引物扩增出9.9条带。从129条DNA带中选择32个最佳的ISSR标记谱带,构建了34个供试菌株的ISSR指纹图谱模式图,并将其计算机化。试验表明ISSR标记技术可以快速、灵敏、准确地应用于黑木耳栽培菌株的鉴别。 3.对ISSR扩增结果进行分析获得6个菌株的8条特异性条带,将其中分别来自供试菌株173(引物P4)和186(引物P16)的2条特异性带,通过回收克隆并测序,应用软件Primer Premier5.0设计SCAR标记引物对,成功地将它们转化为SCAR标记,用于对菌株173和186进行特异性鉴定。这些SCAR标记的建立,为黑木耳栽培菌株的鉴定提供了准确可靠和迅捷方便的新途径。 4.利用11对SRAP引物组合对34个菌株基因组进行扩增,共扩增出154条DNA带,其中具有多态性带148条,占总带数的96.1%,平均每组合引物扩增出14.0条带,显示出比较高的多态比率。聚类分析结果在一定程度上与ISSR标记基本一致,表明SRAP标记也可以作为黑木耳菌株分子指纹分析的有效技术手段。 5.两种DNA指纹分析结果表明,在一定相似水平上,34个菌株可聚为三大类:第一大类栽培菌株主要从东北地区收集,还包括河南和北京的少量菌株;第二大类主要是长江流域及其以南地区收集的菌株,但亦包含来自北方的部分菌株;第三大类主要包括菌株9809、139和8129。该结果一方面表明我国黑木耳栽培菌株引种频繁,另一方面也表明我国黑木耳栽培菌株可能主要来自于野生菌株驯化,东北地区的栽培菌株遗传背景比较单一,而其它地区栽培菌株交流更为频繁。另外,菌株黑29和长白山7号,东A-1与东A-2,139和8129,燕耳K3和薛坪10,C21和C22等菌株两两之间的相似系数较高,表明它们的亲缘关系接近,极可能为同物异名。