猪圆环病毒病(PCVDs)是由猪圆环病毒2型(PCV2)引起的免疫抑制性疾病，给养殖业带来巨大经济损失。目前该病尚无特效治疗方法，疫苗是该病防治的重要手段。　　为了研制一种更加安全，有效的PCV2疫苗，本研究选取PCV2 ORF2基因羧基端基因片段、佐剂基因Ag85A作为靶基因，通过IRES序列连接，依次嵌入重组腺病毒穿梭质粒中，构建了能够单独表达ORF2基因片段的重组腺病毒rAd5 CMV-ORF2及协同表达两段靶基因的重组腺病毒 rAd5 CMV-ORF2-IRES-Ag85A。经荧光定量 PCR、RT-PCR、Westen-blot检测，两株重组腺病毒均能够正确表达外源基因，且所表达外源蛋白具有良好的反应原性；能够感染HEK293细胞进行病毒增殖，达到较高的病毒滴度，且具有良好的遗传稳定性。　　两株重组腺病毒分别对小鼠及仔猪进行了两次免疫，均能够刺激动物机体产生针对PCV2的特异性抗体并维持稳定水平，表现良好的免疫原性。小鼠免疫试验中，除第35d之外，重组腺病毒rAd5 CMV-ORF2-IRES-Ag85A免疫组产生的特异性抗体水平均高于rAd5 CMV-ORF2免疫组，两组差异显著(P≤0.05)。仔猪免疫试验中， rAd5 CMV-ORF2-IRES-Ag85A免疫组体抗体水平在二免后明显高于rAd5 CMV-ORF2抗体水平(P≤0.05)，且第21d后抗体效价均差异显著(P≤0.05)。免疫试验说明：佐剂基因Ag85A具有一定的免疫促进作用。　　试验结果初步表明，本试验中构建的两株重组腺病毒均具有良好的免疫原性，且rAd5 CMV-ORF2-IRES-Ag85A可刺激机体产生更高水平特异性抗体。因此，本研究为筛选更为有效的PCV2重组腺病毒疫苗奠定了基础。