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第一部分 目的：1、脐带血CD34~+干细胞及单核细胞来源DC的数量、免疫表型及功能比较；2、负载卵巢癌细胞系总RNA抗原DC对CIK细胞在体外特异性杀伤的影响。 方法：1、利用免疫磁珠法纯化脐带血CD34~+干细胞，贴壁法纯化脐带血单核细胞；2、分别在干细胞培养体系内加入SCF、FL、GM-CSF、IL-4及TNF-α，单核细胞培养体系内加入GM-CSF、IL-4及TNF-α以诱导成熟DC；3、计算干细胞组扩增DC的数量；4、利用流式细胞仪检测DC的免疫表型，观察两组来源不同DC的特异标志、表面黏附分子及HLA分子的表达有无差异，以混合淋巴细胞反应检测两组来源不同DC在功能上有无差异；5、Trizol提取卵巢癌细胞系SKOV3及HO8910的总RNA作为肿瘤抗原，转染脐带血CD34~+干细胞来源的DC；6、在脐带血单个核细胞培养体系内加入γ-INF、IL-1β、OKT-3及IL-2，诱导CIK细胞，计算扩增并利用流式细胞仪检测免疫表型；7、效应细胞分为与转染SKOV3 DC共培养CIK细胞组、与转染HO8910 DC共培养CIK细胞组、与未转染DC共培养CIK细胞组、单纯CIK细胞组；靶细胞分为SKOV3及HO8910卵巢癌细胞系，分别在效靶比为100∶1及50∶1的条件下以LDH释放法检测CIK细胞的体外杀伤活性。 结果：1、Mini-MACS分选系统可自CBMC中提取0.78±0.31％的CD34~+细胞；2、体外培养14天后可获得原始CD34~+细胞量40.24±9.86倍的细胞；3、不论在CD1a、CD80、CD86及HLA-DR的表达上，或是刺激异体淋巴细胞增生的功能上，脐带血CD34~+细胞与单核细胞来源的DC都没有差别；4、CIK细胞中CD3~+CD56~+阳性的表达率在与RNA转染DC共培养的CIK细胞组、与 天津医科大学博士论文DC共培养的CIK细胞组及单纯CIK细胞组3组间比较无差异:5、脐带血CIK细胞增殖显著，培养14天时可扩增18.18士5.59倍，培养21天时可扩增35.02士6.30倍;5、与未转染或转染DC共培养的CIK细胞在培养第14天后增殖速率大于单纯CIK细胞。但与转染DC共培养并不能提升CIK的增殖率;6、效应细胞与靶细胞为100:1时，SKOV3 RNA转染的DC能诱导出CIK细胞对SKOV3细胞系最强的细胞毒杀伤力。HO8910 RNA转染的DC与未转染的oc次之，且无差别。单纯CIK组细胞毒性最低。而当效应细胞与靶细胞为50:1时，SKOV3 RNA转染的DC仍然能诱导出CIK细胞对SKOV3细胞系最强的细胞毒杀伤力。但HO89 10 RNA转染的DC与未转染的DC诱导的杀伤力相比较高，单纯CIK组细胞毒性仍然最低。在靶细胞为HO8910时，也观察到类似的结果。 小结:1、脐带血单个核细胞可以扩增出大量的CIK细胞，是一种高效的卵巢癌免疫治疗的效应细胞;2、脐带血CD34+干细胞在体外多种细胞因子作用下可扩增诱导出大量成熟有功能的DC，适合作为DC的前体细胞。而以Trizol提取肿瘤细胞总RNA简便易行，可用于冲击DC，进而致敏CIK细胞，诱导出CIK细胞更强大的特异性肿瘤杀伤作用。