在真核细胞中,蛋白质的可逆磷酸化是一种非常普遍的蛋白质翻译后修饰行为,在生物细胞各种各样的生命过程中起着十分重要的调控作用。大量证据表明,很多人体内重大疾病的发生与蛋白质磷酸化异常直接相关。因此,对于磷酸化蛋白质的研究引起了人们越来越多的重视。然而,在结合质谱分析技术对生物样品中的磷酸化蛋白质进行研究时,高丰度的未修饰蛋白质会对磷酸化蛋白的质谱信号产生很大的影响。而且,由于磷酸化蛋白质化学计量值低并且具有高度动态变化的特性等特点,使得对磷酸化蛋白质/肽的分离富集及其磷酸化位点的鉴定成为了极具挑战性的难题。近十年来,已经涌现出了多种能够从高度复杂的生物样品中捕捉痕量磷酸化蛋白/肽的选择性亲和材料,但在富集容量、灵敏度和选择性上还存着一些问题,亟需一种更为有效的富集手段来实现对磷酸化蛋白质更加深入的研究。本文就磷酸化肽分离富集这一研究热点和难点开展实验,将硫脲类受体与磷酸根阴离子之间的相互作用作为开发新型的磷酸化肽富集材料的思路和出发点,制备了3-硫脲基苯甲酸单分子层修饰的多孔硅胶材料。实验先通过傅立叶变换红外光谱、荧光滴定、核磁滴定以及QCM分析手段,考察了3-硫脲基苯甲酸与磷酸化肽之间发生相互作用的情况以及结合能力的大小。然后以硅烷偶联剂作为媒介,将3-硫脲基苯甲酸接枝到多孔二氧化硅微球孔道内制备磷酸化肽富集材料,结合质谱技术分析其对标准磷酸化蛋白酶解液中的磷酸化肽的分离富集效果。通过热重分析、XPS等表征分析手段确定成功地在多孔二氧化硅材料上修饰了3-硫脲基苯甲酸单分子层。利用质谱技术结合QCM分析结果,评估材料分离富集磷酸化肽的效果。结果表明,制备的材料对磷酸化肽的分离富集有一定的效果,且有利于富集多磷酸化肽。鉴于以上分析可知,基于硫脲类与磷酸基团之间相互作用开发的材料对于磷酸化肽的富集具有一定的效果,为将来分离富集磷酸化肽新型材料的开发提供了新的思路和借鉴。