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我们实验室前期研究中获得了小鼠抗人DR5 (TRAIL受体2)单克隆抗体AD5-10,在无交联剂的情况下,能引起多种肿瘤细胞凋亡。对正常的人肝细胞及外周血淋巴细胞无毒副作用。为了进一步探讨其治疗肿瘤的应用前景,本研究将AD5-10人鼠嵌合抗体的轻链和重链与来源于口蹄疫病毒的、具有自我剪切功能的十三肽(2A)连接(H2AL),并克隆入慢病毒(Lentivirus)表达载体,研究了该重组嵌合抗体(命名为Zaptuzumab)的表达、抗原结合特性和对多种肿瘤的治疗作用。H2AL成功地克隆到慢病毒载体pWPXL后,转染人胚肾细胞HEK293,发现该重组抗体(Zaptuzumab)可以高表达并分泌到细胞培养液中,其与人DR5结合的亲和力常数Km为0.5nM；细胞培养液中的Zaptuzumab对HCT116结肠癌等6种肿瘤细胞株具有显著的杀伤作用,其信号转导通路为Caspase依赖的胞外信号凋亡通路和线粒体依赖的凋亡通路,但对正常人胚胎眼Tenon’s囊成纤维细胞基本无毒性；重组慢病毒载体包装和纯化后,获得了滴度为109TU/ml的重组慢病毒颗粒(Lenti-H2AL),该重组病毒感染HEK293细胞后,获得了可稳定表达Zaptuzumab的细胞株,细胞培养液中分泌的Zaptuzumab嵌合抗体浓度达12±0.7μg/ml;该重组病毒感染SMMC7721肝癌、肺腺癌等10种肿瘤细胞株72小时后,肿瘤细胞存活率为7.36-92.73%,对多种肿瘤细胞株具有显著的细胞毒作用；将感染了该重组病毒的HCT116细胞接种到BALB/c裸鼠皮下,观察移植瘤形成和生长情况,发现实验组肿瘤体积仅为对照组的10%,表明该重组病毒感染具有显著抑制肿瘤形成和生长的能力；在移植瘤组织及荷瘤动物外周血中检测到Zaptuzumab表达,分别达到890ng/mg和1000ng/ml;建立A549肺原位癌动物模型,经肌肉单独注射该重组病毒或与尾静脉注射丝裂霉素(MMC)联合给药,分别可延长肺原位瘤小鼠的生存期(P<0.01)；以白介素-2活化的人外周血单.个核细胞(PBMC)作为效应细胞,以对Zaptuzumab敏感性较低的A549细胞为靶细胞,以健康人的血清为补体来源,研究Zaptuzumab抗体依赖的细胞杀伤效应(ADCC)和补体依赖的细胞毒(CDC)作用,发现在Zaptuzumab的浓度为6μg/ml、效靶细胞比为25时,A549细胞的存活率降低了38%。在Zaptuzumab的浓度为3μg/ml和有人血清补体存在时,A549的存活率降低了40%,提示慢病毒介导Zaptuzumab表达除可以诱导肿瘤细胞凋亡外,还可以激活抗体依赖的和补体依赖的细胞杀伤效应。本论文还进一步用该重组病毒感染小鼠骨髓间充质干细胞(mMSC),研究Zaptuzumab在mMSC中的表达,结果表明重组病毒感染mMSC后,Zaptuzumab在mMSC培养液中的表达量达到92ng/ml;用含有Zaptuzumab的mMSC细胞培养液处理U251等7种肿瘤细胞株,发现细胞的存活率分别为13-83%,提示骨髓间充质干细胞(mMSC)表达Zaptuzumab具有显著的肿瘤杀伤作用。结论慢病毒介导人鼠嵌合抗体Zaptuzumab表达可诱导多种肿瘤细胞凋亡,抑制移植瘤在裸鼠体内形成和生长,Zaptuzumab联合化疗药物可显著延长荷瘤小鼠存活期：Zaptuzumab还可诱导ADCC及CDC并杀伤肿瘤细胞；重组慢病毒感染骨髓间充质干细胞可高效表达Zaptuzumab并杀伤肿瘤细胞。本研究为应用慢病毒介导嵌合抗体表达治疗肿瘤提供了新的实验依据,具有潜在的临床应用前景。