断奶仔猪腹泻是全球集约化猪场的高发疾病之一,影响仔猪的生长发育,给养猪业造成了巨大的经济损失。产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是导致断奶仔猪腹泻的主要致病菌,菌毛黏附素和肠毒素是其重要的致病因子。目前,接种疫苗是防治断奶仔猪腹泻有效的有效方法。本研究采用微囊化技术,以重组肠毒素为抗原主要成分制备了口服微囊疫苗,以期为断奶仔猪腹泻口服疫苗的研究奠定基础。本研究的实验主要内容如下:采用重组肠毒素蛋白SLS为疫苗抗原芯材,以天然高分子材料海藻酸钠和壳聚糖为包被壁材,制备了海藻酸钠-壳聚糖-SLS微囊疫苗。首先通过单因素实验研究了氯化钙浓度、海藻酸钠浓度、壳聚糖浓度和凝胶作用pH值对微囊包埋率的影响,然后设计正交实验对微囊疫苗制备工艺进行优化。结果显示:微囊最佳制备条件为:海藻酸钠浓度为2%,氯化钙浓度为3%,壳聚糖浓度为0.8%,凝胶作用pH值为5。由最佳制备方案制得的海藻酸钠-壳聚糖-SLS蛋白微囊疫苗包埋率为83.43%,成型圆整。实验研究了微囊在胃肠液中的释放情况,并考察了微囊在胃肠液中的溶胀性以及离子强度对微囊溶胀性的影响,以期检验微囊能否到达肠道及其缓释效果。实验结果显示微囊对溶液离子强度有一定的敏感性,Na+和Cl-浓度的升高会使微囊的空间结构变得松散,微囊溶胀率升高。在胃液中抗原蛋白释放量较低,约为16%,同时没有明显溶胀,而微囊在肠液中的释放量达到87%且溶胀度在2左右,说明微囊能够在胃液中保持其生物活性,在肠液中能够有较好的释放效果,能够保证疫苗持久发挥免疫效果。实验评估了微囊疫苗对断奶幼鼠的免疫效果。实验将三周龄幼鼠分成五组,分别为对照组、未包被组、包被组、蜂胶包被组及铝佐剂包被组,检测了幼鼠在免疫后血清中的特异性抗体及细胞因子水平并评估了 ETEC攻毒后幼鼠肠道损坏情况。结果显示幼鼠在口服免疫3周后,体内ETEC特异性抗体增加,且包被各组特异性抗体效价（P＜0.01）均高于对照组及未包被组,其中佐剂包被组效价均高于包被组;细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-6检测结果显示包被各组的细胞因子水平均高于对照组及未包被组,其中两个佐剂包被组保持较高的水平,蜂胶包被组细胞因子水平最高。说明微囊包被能够保护抗原蛋白在肠道部位持续刺激机体产生免疫反应,佐剂的加入更能增强这种免疫效果。攻毒实验结果显示,口服微囊疫苗免疫组幼鼠存活率均在80%以上,而对照组幼鼠的存活率为30%。组织学观察结果也说明微囊疫苗免疫能够有效保护幼鼠小肠免受ETEC的侵袭。综上所述,本研究中制备的海藻酸钠-壳聚糖-SLS蛋白微胶囊能够引发强烈的免疫反应,并为断奶幼鼠提供保护,使其免受ETEC感染。