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本研究用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的重组GP5蛋白，成功制备出4株针对GP5蛋白的单克隆抗体，并对单克隆抗体的特性进行了鉴定和分析。GP5系列表位单克隆抗体的研制，有利于开展GP5抗原表位的定位分析。同时，结合ORF5的遗传演化分析，有利于阐明GP5在PRRSV感染中的免疫学功能。 pGEX-4T-dORF5重组融合蛋白经亲和层析纯化后作为免疫抗原免疫8周龄Balb／c小鼠，第一次免疫用抗原加等量弗氏完全佐剂背部皮下多点注射，然后两次用抗原加等量弗氏不完全佐剂同法免疫，免疫剂量为100μg，只，融合前三天做加强免疫，用不加佐剂抗原腹腔注射，剂量为100μg／只。获得免疫脾细胞，采用细胞融合技术与鼠源SP2／0骨髓瘤细胞进行融合。用部分纯化的pET32a-ORF5重组融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤，建立重组结构蛋白GP2间接ELISA方法，对重组GP5间接ELISA方法筛选出的阳性上清进行再次检测，淘汰假阳性孔。选择强阳性孔，采用有限稀释法进行亚克隆，获得4株稳定分泌抗GP5单抗的杂交瘤细胞系，分别命名为B6A3、B6A4、F12F10和B11F11B2。经间接ELISA检测，结果表明B6A3和B6A4效价达到1：320000，F12F10和B11F11B2效价在1：320000以上。对单抗进行亚类鉴定结果表明，所获得的4株单抗都为IgG2a亚类，轻链为κ型。免疫印迹试验表明，单抗B6A3、F12F10能与重组GP5产生反应。制备PRRSV细胞培养单层，间接免疫荧光抗体试验表明，B6A3、F12F10能与全病毒反应，产生特异性荧光。选择B6A3在HS.2H细胞系上进行病毒中和试验，结果表明该株单抗中和活性为可疑。把各株单抗分别作1：80000和1：160000稀释，B6A3和F12F10，B6A3和B11F11B2，F12F10和B11F11B2混合进行间接ELISA检测时，OD450nm值比其中任何一种单抗单独测定时的OD450nm值高。推测，B6A3和F12F10，B6A3和B11F11B2．F12F10和B11F11B2可能识别不同的抗原表位。