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本研究用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的重组GP5蛋白,成功制备出4株针对GP5蛋白的单克隆抗体,并对单克隆抗体的特性进行了鉴定和分析。GP5系列表位单克隆抗体的研制,有利于开展GP5抗原表位的定位分析。同时,结合ORF5的遗传演化分析,有利于阐明GP5在PRRSV感染中的免疫学功能。 pGEX-4T-dORF5重组融合蛋白经亲和层析纯化后作为免疫抗原免疫8周龄Balb/c小鼠,第一次免疫用抗原加等量弗氏完全佐剂背部皮下多点注射,然后两次用抗原加等量弗氏不完全佐剂同法免疫,免疫剂量为100μg,只,融合前三天做加强免疫,用不加佐剂抗原腹腔注射,剂量为100μg/只。获得免疫脾细胞,采用细胞融合技术与鼠源SP2/0骨髓瘤细胞进行融合。用部分纯化的pET32a-ORF5重组融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤,建立重组结构蛋白GP2间接ELISA方法,对重组GP5间接ELISA方法筛选出的阳性上清进行再次检测,淘汰假阳性孔。选择强阳性孔,采用有限稀释法进行亚克隆,获得4株稳定分泌抗GP5单抗的杂交瘤细胞系,分别命名为B6A3、B6A4、F12F10和B11F11B2。经间接ELISA检测,结果表明B6A3和B6A4效价达到1:320000,F12F10和B11F11B2效价在1:320000以上。对单抗进行亚类鉴定结果表明,所获得的4株单抗都为IgG2a亚类,轻链为κ型。免疫印迹试验表明,单抗B6A3、F12F10能与重组GP5产生反应。制备PRRSV细胞培养单层,间接免疫荧光抗体试验表明,B6A3、F12F10能与全病毒反应,产生特异性荧光。选择B6A3在HS.2H细胞系上进行病毒中和试验,结果表明该株单抗中和活性为可疑。把各株单抗分别作1:80000和1:160000稀释,B6A3和F12F10,B6A3和B11F11B2,F12F10和B11F11B2混合进行间接ELISA检测时,OD450nm值比其中任何一种单抗单独测定时的OD450nm值高。推测,B6A3和F12F10,B6A3和B11F11B2.F12F10和B11F11B2可能识别不同的抗原表位。