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目的:利用siRNA技术探讨HBx基因沉默对肝癌细胞HepG2.2.15迁移能力的影响。
方法:1.pSIHBV/X质粒的鉴定与扩增。2.HepG2.2.15细胞的培养。3.pSIHBV/X质粒转染并检测转染效率。4.Transwell及划痕试验检测细胞迁移能力。5.EdU法检测细胞DNA合成情况。6.Real-time PCR法检测HBx与vegf及mmp-9 mRNA表达变化。7.Western blot方法检测VEGF与MMP-9蛋白表达的变化。结果:通过测序验证pSIHBV/X质粒构建正确，转染效率为38.58％; Transwell和划痕实验检测细胞迁移情况，结果显示转染72小时后，pSIHBV/X实验组迁移能力与对照组相比分别下降59.92％和38.64％，差异有统计学意义(P＜0.05); HepG2.2.15细胞转染48小时后，pSIHBV/X实验组与对照组相比DNA合成率下降9.469％(P＜0.05); Real-time PCR和Western blot检测结果表明，HepG2.2.15细胞经pSIHBV/X质粒干扰后，细胞中mmp-9、vegf、 HBx的mRNA水平和MMP-9、VEGF的蛋白水平表达分别有不同程度的下调，与对照组比较差异有统计学意义(p＜0.05)结论:利用HBx siRNA干扰质粒可抑制HBx基因的表达，抑制肿瘤细胞DNA合成并下调与肿瘤细胞迁移相关的mmp-9、veg基因在mRNA水平和蛋白水平的表达，降低HepG2.2.15细胞迁移的能力。