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目的:自然流产(spontaneouse abortion,SA)是妊娠期常见并发症,其发生率占全部妊娠的10-15%,其中80%以上发生于妊娠12周以内,即早期自然流产。妊娠从免疫学角度看类似于器官移植,带有父方同种异体抗原的胚胎对母体来说是一个半同种移植物,流产是移植物被排斥的结果。正常妊娠时,胚胎能够不受母体排斥而存活,这与母-胎界面微环境保持平衡有着很大关系。近来研究表明,许多生物活性物质参与调节母-胎界面微环境平衡而维持妊娠。血红素氧合酶(Heme Oxygenase,HO)及其代谢产物一氧化碳(carbon monoxide,CO)是人体内重要的生物活性物质,表达于子宫内膜、蜕膜及绒毛组织。HO表达降低,导致内源性CO含量下降,与早期自然流产关系密切。本研究旨在通过测定正常子宫内膜、正常早孕和早期自然流产患者蜕膜、绒毛中HO-1、HO-2的表达情况和CO含量变化及其相关性,探讨其在妊娠维持及早期自然流产发病中的作用。方法:资料来源:选自2006.12-2007.9在河北医科大学第二医院妇产科门诊手术室行清宫术、人工流产术或因不孕行诊刮术患者及妇科病房因单纯性卵巢囊肿行卵巢囊肿剥除术患者。SA组:自然流产≥2次,月经规则,停经47-75天因腹痛或阴道出血就诊,B超提示胚胎停止发育,排除染色体、解剖、内分泌异常、感染及自身免疫性疾病。正常早孕组:20例,为月经规则,孕49-70天要求人工流产术的正常妊娠妇女,既往至少有1次正常分娩史,无自然流产、早产、死胎及死产等不良孕产史,人流前均做B超可见胚芽及心管搏动且无任何流产迹象。正常子宫内膜组:30例,同期因不孕症行诊刮术或单纯性卵巢囊肿手术患者,月经规则,术前6个月内未服用过激素类药物,无急慢性盆腔炎史及其他病史,据组织病理证实增殖期内膜14例,分泌期内膜16例。研究对象各组平均年龄,SA组与正常早孕组平均停经天数均无统计学差异。标本采集:SA组和正常早孕组于清宫术或人工流产术后留取蜕膜和绒毛组织,正常子宫内膜组于诊刮术或卵巢囊肿剥除术时刮取适量子宫内膜组织,所有标本均用无菌生理盐水冲洗干净,每份标本分为两部分,一部分经4%多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋、5um连续切片备用;另一部分取组织100mg,加入10%预冷的0.1mol/L KH2PO4/K2HPO4缓冲液制成匀浆,以3000r/min离心15min,取上清-70℃保存待测COHb%。(1)采用免疫组化PV法检测各组织中HO-1、HO-2的表达情况。(2)采用双波长定量的方法,将匀浆上清在756M型分光光度计上用420nm和432nm两个波长测定吸光度,依比尔定律建立综合方程求出COHb百分含量(X%)。数据采用SPSS13.0统计软件进行统计分析,显著性水准为P<0.05。结果:1. HO-1在正常子宫内膜、正常早孕和早期自然流产患者蜕膜和绒毛组织中均有表达;主要定位于子宫内膜腺上皮细胞、蜕膜腺上皮细胞、蜕膜细胞、绒毛间质、合体滋养细胞和细胞滋养细胞的胞浆和胞膜,合体滋养细胞着色较细胞滋养细胞强。分泌期宫内膜表达HO-1与增殖期宫内膜比较差异无显著性,(P>0.05);正常早孕组和SA组蜕表达HO-1均高于分泌期宫内膜(P<0.01); SA组绒毛表达HO-1明显低于正常早孕组,差异有显著性(P<0.05),而蜕膜表达HO-1 SA组与正常早孕组比较,差异无显著性(P>0.05)。2. HO-2在正常子宫内膜、正常早孕和早期自然流产患者蜕膜和绒毛组织中均有表达;主要定位于子宫内膜腺上皮细胞、蜕膜腺上皮细胞、蜕膜细胞、合体滋养细胞、细胞滋养细胞、血管内皮细胞的胞浆和胞膜,合体滋养细胞着色较细胞滋养细胞强,绒毛间质着色较弱。分泌期宫内膜表达HO-2高于增殖期宫内膜(P<0.01);正常早孕组和SA组蜕膜表达HO-2均高于分泌期宫内膜(P<0.01, P<0.05);SA组蜕膜和绒毛表达HO-2均明显低于正常早孕组(P<0.01)。3. COHb水平分泌期宫内膜组[(0.17±0.07)%]高于增殖期宫内膜组[(0.10±0.05)%](P<0.01);妊娠组蜕膜COHb水平(正常早孕组[(0.37±0.08)%]和SA组[(0.23±0.10)%])高于分泌期宫内膜组[(0.17±0.07)%](P<0.01, P<0.05);蜕膜及绒毛COHb水平SA组[(0.23±0.10)%、(0.31±0.12)%]均明显低于正常早孕组[(0.37±0.08)%、(0.56±0.13)%] (P<0.01)。4. SA组蜕膜组织中CO水平与HO-1、HO-2表达均呈正相关,P<0.05, P<0.01;SA组绒毛组织中CO水平与HO-1、HO-2表达均呈正相关,P均<0.01。结论:1.HO-1、HO-2表达于正常子宫内膜,且分泌期HO-2达增强,COHb水平升高,更好的维护子宫内膜功能,促进血管生长和舒张,与子宫内膜正常周期性变化相协调。2.HO-1、HO-2在蜕膜组织中表达及COHb水平较子宫内膜组织升高,提示HO-CO可能与妊娠初期子宫内膜蜕膜化及螺旋动脉生理重铸有关,从而有利于滋养细胞侵袭子宫蜕膜和胚胎的种植与发育。3.SA患者蜕膜组织HO-1表达情况与正常早孕组相比无显著性差异,可能与HO-1受较多因素调节有关,SA患者蜕膜组织HO-2表达减弱,提示在保护蜕膜功能方面,HO-2发挥了较大作用;绒毛组织HO-1、HO-2及COHb水平下降,对胚胎滋养细胞和血管内皮细胞的保护作用减弱,影响滋养细胞的侵袭能力和血管的舒张功能,母-胎界面抗炎、抗氧化、抗血小板聚集能力下降,加速母体对胎儿的排斥作用,最终导致流产的发生。4.SA患者蜕膜及绒毛组织CO水平与HO-1、HO-2表达呈正相关,HO表达降低,分解血红素产生的CO含量下降,HO-1、HO-2与CO有协同作用,共同参与了流产的发生。