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苎麻(Boehmeria nivea(L.)Gaud.)为荨麻科(Urticaceae)苎麻属(Boehmeria)中多年生、宿根性的草本植物,素有“中国草”之称,是中国传统的优势特产纤维作物。苎麻是无性繁殖为主的异花授粉作物,以茎皮纤维为产量,杂种优势利用潜力较大,但苎麻品种高度杂合,传统育种费时费力,转基因技术有助于突破此难题,而高效的外植体再生是转基因育种的前提条件,但苎麻高效再生技术目前尚未能广泛应用。为此,本文以苎麻种子实生苗为材料,尝试用“一步法”和“两步法”建立苎麻高效再生体系,开展了苎麻基因型、激素配比、培养环境、外植体类型及预处理方式、AgNO3浓度等因素对再生影响的研究,同时探索了苎麻外植体对潮霉素、头孢霉素的敏感性,并用CAPS、ISSR分子标记探索部分实验材料的遗传背景,期望为苎麻遗传转化高效再生技术的建立奠定基础。主要研究结果如下: 1.苎麻种子的萌发率受基因型和保存时间的影响,保存了3年的不同品种苎麻种子萌发率依次为GS13-X2<GS13-X1=中苎1号<湘苎3号,保存了3年、2年和1年的湘苎3号种子萌发率依次为:42.22%、60.00%、80.00%。 2.“一步法”中,再生频率最高的品种为GS13-X2,其次为湘苎3号,中苎1号最低。对于湘苎3号,用于下胚轴愈伤组织诱导及不定芽分化的最适培养基为MS+0.3 mg/L TDZ+0.05 mg/L2,4-D,再生频率为31.25%,平均再生芽数达4.08个;光照培养箱中下胚轴的再生情况约为组培室中的两倍;外植体经3000 lux的光照预处理更容易出芽,以光照28d的茎段再生最高;AgNO3显著促进下胚轴的再生,最适浓度为1.0 mg/L;再生苗生根的最佳培养基为1/2 MS+0.01-0.05 mg/LNAA。 3.“两步法”中,愈伤组织块在含TDZ和2,4-D的培养基上能长出淡绿色颗粒状的愈伤组织,并能分化出不定芽;在含6-BA和GA3的培养基上愈伤组织容易褐化,且无不定芽再生。 4.湘苎3号下胚轴再生的潮霉素筛选压为5 mg/L,头孢霉素筛选压为400mg/L。 5.不育系GS14-1、保持系GS13-X2和恢复系湘苎5号经CAPS分析,具有相同的胞质来源;不同年份收获的湘苎3号种子实生苗经ISSR分析提示存在遗传差异。