目的:构建含人类疱疹病毒8型(HHV-8)致瘤基因K1的真核表达质粒,将其导入人血管内皮细胞(EC)和前列腺癌细胞(PC-3)中进行表达,并初步探讨K1蛋白对PC-3细胞和EC细胞增殖的影响。方法:根据GenBank中登记的K1基因核酸序列设计PCR引物,在其5’端及3’端分别引入XhoI和XbaI酶切位点,并在其下游引入Flag标签蛋白序列用于后期K1蛋白表达的检测。以含有K1基因的HHV-8 DNA为模板扩增K1基因,经双酶切消化后将其克隆入真核表达载体pCI-neo中。重组质粒经核酸测序鉴定后分别瞬时转染EC细胞和PC-3细胞,于转染后48 h提取细胞总RNA及总蛋白,分别以RT-PCR和Western blot检测K1基因的转录和表达情况。最后运用MTT和流式细胞术(FCM)检测K1蛋白对PC-3细胞和EC细胞增殖的影响。结果:成功构建了含K1基因的重组质粒pCI-K1,核酸序列分析显示克隆的K1基因全长928 bp,与GenBank中登记的K1基因100%同源,引入的Flag序列完全正确。经pCI-K1转染后的EC细胞及PC-3细胞中均可检测到K1 mRNA和K1蛋白。MTT和流式细胞术检测发现K1蛋白促进PC-3细胞和EC细胞的增殖。结论:重组质粒pCI-K1构建成功并在EC细胞和PC-3细胞中正确表达。K1蛋白促进PC-3细胞和EC细胞的增殖。