新型藻蓝蛋白/羧甲基壳聚糖纳米微球的制备及其对HeLa细胞生长的抑制作用研究

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目的:制备新型负载藻蓝蛋白(C-phycocyanin,C-PC)的羧甲基壳聚糖(Carboxymethyl chitosan,CMC)纳米微球(nanoparticles,NPs),探讨藻蓝蛋白/羧甲基壳聚糖纳米微球(C-PC/CMCNPs)对He La细胞生长的影响及分子机制。方法:以CMC和C-PC的质量比、CMC浓度、Ca Cl2浓度为考察因素,利用正交分析方法,通过检测C-PC/CMCNPs的粒径和包封率,优选C-PC/CMCNPs的制备条件,并在最佳条件下制备C-PC/CMCNPs。然后将C-PC、CMC和C-PC/CMCNPs分别作用于He La细胞,CCK-8法检测He La细胞的增殖,免疫组化法检测JNK蛋白的表达情况,免疫荧光法检测Bcl-2蛋白的表达,Western blotting法检测Caspase-3蛋白表达的差异,流式细胞术检测He La细胞的凋亡情况。结果:筛选出C-PC/CMCNPs的最佳制备条件为CMC与C-PC的质量比为1:2,CMC浓度为1 mg/ml,Ca Cl2浓度为1 mg/ml。最终所制备的C-PC/CMCNPs的平均粒径为118.4±2.07 nm,并具有较高的包封率(63.2%);其12 h的累积缓释率超过60%。C-PC、CMC和C-PC/CMCNPs均能抑制He La细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,促进促凋亡基因Caspase-3和JNK的表达,抑制抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达,其中C-PC/CMCNPs的作用效果最为显著。结论:优化制备条件得到具有高效抗瘤、缓释性能良好的C-PC/CMCNPs,其抗肿瘤作用可能是通过抑制He La细胞生长、促进凋亡信号在细胞内的转导、最终诱导肿瘤细胞的凋亡来实现的。
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