急性缺血性脑卒中（Acute Ischemic Stroke,AIS）具有高致残率和高复发率的特点。一直以来AIS的各种药物治疗,特别是中药提取物治疗AIS一直是研究热点。丹参作为中国的传统中药,具有活血通络、散瘀止痛等功效,在临床上应用广泛。为此我们设计了本次研究方案,从抗炎、抗凋亡、调节纤溶功能三个方面,观察注射用丹参多酚酸（salvianolate injection,SLI）对AIS的保护作用,探讨可能的机制。第一部分SLI治疗AIS的临床疗效观察目的:对比SLI治疗前后AIS患者血液生化及凝血相关指标、炎性因子水平,及NHISS评分、m RS评分的变化,评估其临床疗效。方法:收集我院神经内科2016.1～2018.8首次发病的AIS患者共100例,随机分为SLI组和对照组,每组50例。对比两组患者的基线资料、治疗前后血液生化及凝血相关指标,以及NHISS评分、m RS评分的变化。随后从两组中各随机抽取30例患者,对比治疗前后ICAM-1、VCAM-1、IL-4、u PA、PAI-1/t PA水平。结果:1.两组人群入院时基线资料相比较无明显统计学差异,P>0.05。2.治疗后SLI组的PLT、FIB水平低于对照组,（P<0.01,P<0.05）而PDW水平显著高于对照组,P<0.01。SLI组治疗前后组间比较,PLT、FIB、hs CRP治疗后较前降低,P<0.01;对照组治疗后BUN水平升高,P<0.05;hs CRP、DD水平降低,P<0.01。3.治疗7天、1月后两组NHISS评分水平均较治疗前显著降低,P<0.01;治疗7天后的SLI组NHISS降低更显著,P<0.05;两组人群治疗1月后m RS评分、治疗3个月后的治疗有效率相比较无显著差异,P>0.05。4.SLI组治疗前后ICAM-1、VCAM-1、u PA、PAI-1/t PA水平显著降低,P<0.05;IL-4较前降低,但差异无显著性意义,P>0.05;对照组治疗前后ICAM-1、VCAM-1、IL-4、u PA、PAI-1/t PA水平显著降低,P<0.05。结论:1.SLI对治疗前后的肝功能、肾功能无显著影响,治疗期间无患者出现不良反应,提示其安全性较好,而无明显出血风险;在改善AIS患者的治疗效果及改善预后方面与对照治疗的效果相当。2.SLI可通过降低AIS患者的hs CRP、ICAM-1、VCAM-1水平,起到抑制体内炎症反应的治疗作用;3.SLI可通过降低AIS患者的PLT、FIB等水平,下调u PA、PAI-1、t PA的表达,升高PDW水平,起到调节血小板功能,从而调节凝血纤溶系统之间的平衡。第二部分H₂O₂诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤模型的建立及SLI对血小板功能的影响目的:建立H₂O₂诱导的HUVECs损伤模型,观察不同浓度SLI对细胞活性的影响;对SLI的主要成分进行分析,观察SLI对大鼠体外血小板功能的影响。方法:建立H₂O₂诱导的HUVECs损伤模型,观察不同浓度SLI对细胞活性的影响。采用HPLC和LC-MS技术检测SLI的主要成分。应用流式细胞仪检测法不同浓度SLI对ADP诱导的大鼠血小板功能的影响。结果:1.成功建立了H₂O₂诱导HUVECs损伤模型,绘制HUVECs生长曲线。2.适合浓度（0.8,1.6mmol/L）的SLI会显著减轻H₂O₂造成的细胞损伤,P<0.01;其中60 min比30min的保护作用更强,P<0.01;3.应用HPLC法检测出SLI的主要成分为丹参多酚酸D（3.70%）、迷迭香酸（2.68%）、紫草酸（3.86%）及丹参多酚酸B（53.81%）;应用LC-MS法检测出SLI种包含29种明确的化学成分,这其中包括丹参素、丹参多酚酸B、丹参多酚酸A、丹参多酚酸D等14种常见酚酸;4.不同浓度（0.8,0.4,0.2mmol/L）的SLI对大鼠血小板聚集具有抑制作用,P<0.05;但各浓度之间的差异不明显,P>0.05。结论:1.SLI对HUVECs损伤模型具有保护作用,并可通过延长作用时间增加这一作用。2.SLI的成分明确,构成稳定,在临床使用中可通过其中的多种已知成分起到治疗作用。3.SLI对大鼠血小板聚集具有抑制作用,对缺血缺氧损伤起到保护作用。第三部分SLI对H₂O₂诱导的HUVECs损伤模型的保护作用目的:分析不同浓度SLI对H₂O₂诱导的HUVECs损伤后炎性因子、凝血纤溶相关因子的影响,探讨可能的机制。方法:应用ELISA法检测H₂O₂损伤后炎性因子及凝血纤溶相关因子的水平变化,观察不同浓度SLI对上述指标的影响;应用JC-1法和Hoechst法观察不同浓度SLI对H₂O₂造成的细胞凋亡的保护作用;应用Western Blot法测量Bcl-2、Bax、Cleaved-capcase-3等信号通路相关蛋白表达水平,观察不同浓度的SLI对上述指标水平的影响。结果:1.H₂O₂模型组的炎性因子（IL-1β、IL-17a、ICAM-1、VCAM-1、TNF-α）显著降低,P<0.0001;抗炎因子IGF-1显著升高,P<0.0001;不同浓度（0.05,0.1,0.2,0.4,0.8,1.6mmol/L）SLI能够浓度依赖性地降低上述炎性因子和IGF-1的水平,P<0.0001。2.H₂O₂模型组的凝血相关因子u PA、PAI-1、PAI-1/t PA显著增高,P<0.0001;不同浓度（0.05,0.1,0.2,0.4,0.8,1.6,3.2mmol/L）SLI能够浓度依赖性地降低u PA（P<<0.0001）、PAI-1（P<0.0001）、PAI-1/t PA（P<0.01）的水平。3.JC-1法显示不同浓度（0.1,0.2,0.4,0.8mmol/L）SLI对H₂O₂造成的细胞早期凋亡的具有保护作用:随着浓度的增加JC-1染色后的绿色荧光逐渐减少,红色荧光逐渐增加。4.Hoechst法显示不同浓度（0.4,0.8,1.6mmol/L）SLI对H₂O₂造成的细胞凋亡的保护作用:随着浓度的增加染色亮度逐渐趋向正常细胞,且细胞核固缩分叶程度较前减轻。5.H₂O₂模型组的Bax、Cleaved-caspase3表达显著升高,P<0.01,Bcl-2表达显著降低,P<0.01;加入适当浓度（0.2,0.4,0.8,1.6 mmol/L）的SLI能够下调Bax、Cleaved-caspase3的表达,上调Bcl-2的表达。结论:1.适合浓度的SLI对H₂O₂诱导的HUVECs损伤模型具有抗炎保护作用,这一作用可能是通过下调IL-1β、IL-17a、ICAM-1、VCAM-1、TNF-α的表达,上调IGF-1的表达而实现的;同时SLI还具有调节纤溶功能保护作用,这一作用可能是通过减少PAI-1、u PA的表达,上调t PA的表达而实现的。2.不同浓度SLI会剂量依赖性地抑制H₂O₂诱导的细胞凋亡,这一作用可能是通过上调Bcl-2的表达,减少Bax、Cleaved-caspase-3的表达实现的。