目的结直肠癌(colorectal carcinoma, CRC)是消化系统常见的恶性肿瘤,在我国发病率日益增加。机体的免疫功能与结直肠癌的发生发展有密切的关系。结直肠癌表达许多肿瘤相关抗原,这些肿瘤相关抗原可以被机体免疫系统所识别,并且宿主免疫会设法攻击结直肠癌细胞,引起大量免疫细胞向结直肠癌组织的招募和聚集。但是结直肠癌细胞同时将会采取多重办法来逃避这种免疫系统的攻击,其中包括通过释放某些免疫抑制因子来抑制免疫细胞的功能。当免疫细胞功能受到抑制时,其发挥的效应可能会发生改变,也许会促进肿瘤进展和转移。巨噬细胞是固有免疫系统中重要的细胞组成部分,具有广泛的功能,包括吞噬作用、抗原提呈作用、分泌生长因子、细胞因子等功能。在肿瘤微环境中的巨噬细胞,我们一般统称为肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages, TAMs)。肿瘤相关巨噬细胞参与调节肿瘤进展中的各个关键步骤,具有双重性。一方面能够直接杀伤肿瘤细胞、向T细胞提呈肿瘤抗原；而另一方面能够促进肿瘤生长、浸润、转移,促进血管生长,组织结构重建。目前,大量研究证据表明肿瘤相关巨噬细胞在多种肿瘤中具有促肿瘤作用。虽然国外有研究表明巨噬细胞表达量增加与结直肠癌的发病有密切关系,然而其在结直肠癌中的作用却仍存有争议。一些研究显示巨噬细胞在结直肠癌中具有抗肿瘤作用,且与好预后有关。相反,另一些研究显示大量的巨噬细胞浸润与肿瘤发展、生长有关。CD68是Ⅰ型高糖基化跨膜蛋白,属于糖蛋白的溶酶体相关膜蛋白家族。一般被认为是人类单核细胞和巨噬细胞的选择性标记物,它的表达主要由巨噬细胞特异性启动因子进行调节,在诊断和研究中作为单核巨噬细胞的特定标记物而被广泛应用。传统检测组织中的巨噬细胞多采用结合特异性抗体的免疫组织化学方法,但受敏感度的限制和影响。荧光定量PCR是定量目的基因的一个敏感技术,是目前确定样品中DNA或者cDNA拷贝数最敏感、最准确的方法,已经被广泛应用于多种领域。本实验以CD68作为肿瘤相关巨噬细胞的标记物,实时荧光定量聚合酶链反应对CD68mRNA表达水平进行定量检测,并且分析结直肠癌中肿瘤相关巨噬细胞表达情况与临床病理参数之间的关系,同时采用CD68单克隆抗体进行免疫组化染色确认。并欲建立一个精确定量检测肿瘤相关巨噬细胞在人结直肠癌组织中表达的实验室方法,从而可以拓展至对血液或体液中的巨噬细胞进行定量检测,进而为临床疾病的诊断和预后判断提供精确数据。材料和方法收集郑州大学第二附属医院结直肠癌患者手术切除标本及消化内科结肠镜下所取的结直肠正常组织标本,标本取材后立即经RNA later保存液处理,-80℃超低温冰箱中存储备用,同时收集患者临床资料。1荧光定量PCR法检测结直肠癌组织及正常结直肠组织中巨噬细胞常用标记物CD68mRNA的表达。2分析患者临床病理参数与荧光定量PCR结果间相关性。3免疫组织化学法检测结直肠癌组织及正常结直肠组织中CD68蛋白的表达。利用SPSS16.0软件进行数据统计。计量资料用x±Sx表示,采用Mann-Whitney U检验。P<0.05认为差异有统计学意义。结果130例结直肠癌组织CD68mRNA的表达量为(1.78+0.53),与正常结直肠组织相比,明显升高1.78倍(P<0.05)。2CD68mRNA在结直肠癌组织中的表达水平与临床病理参数如：性别、发生部位、TNM分期、Duke’s分期及淋巴结是否累及均无明确相关(P>0.05)。3CD68定位于肿瘤相关巨噬细胞胞质内,呈红色。结直肠癌间质组织中CD68表达率为(2.06+0.19),正常结直肠间质组织的表达率为(1.36±0.13),相差显著(P<0.05)；结直肠癌上皮组织中CD68表达率为(0.83±0.23),正常结直肠上皮组织中表达率为(0.09+0.03),相差显著(P<0.05)。结论1结直肠癌组织中巨噬细胞的表达量明显高于正常组织中巨噬细胞的表达量。2荧光定量PCR法结合巨噬细胞标记物CD68可以精确定量肿瘤相关巨噬细胞在结直肠癌中的表达情况。3荧光定量PCR法结合巨噬细胞标记物CD68是鉴别结直肠癌中肿瘤相关巨噬细胞的补充性实验。