口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种烈性传染病,严重危害畜牧业生产,对流行国家造成了巨大的经济损失。目前,接种疫苗仍是防治该病的重要手段之一,现有的疫苗接种动物后,虽能诱导免疫动物产生体液和细胞免疫反应,但其在免疫目标动物后,都会有一段时间的有效抗体产生期,即免疫空白期。动物在这一时期若遇到病原微生物的入侵往往会造成疫病流行。为了解决这一问题,本研究以Asia I/JQ株为模板,进行了双效疫苗的探索研究,获得了以下结果:1.用RT-PCR得到针对FMDV基因组5’非编码区的AS片段、P1+2A结构蛋白基因和3C非结构蛋白基因,将P1+2A、3C和AS依次克隆至T载体,测序结果表明,已得到正确的目的基因片段。2.将目的基因AS、P1+2A+3C依次亚克隆到逆转录病毒表达载体pQCXIX的多克隆位点I和Ⅱ中,经酶切、PCR鉴定及测序分析,表明成功构建了FMDV双效表达载体pQC-AS-P1+2A+3C。3.将重组逆转录病毒载体在脂质体介导下转染AmphoPack293细胞,收获经AmphoPack293包装的假病毒,并在Polybrene(聚凝胺)的介导下感染靶细胞BHK-21,RT-PCR检测表明双效表达质粒中的AS在细胞中得到了有效转录;4.经间接免疫荧光检测证实,口蹄疫的P1+2A基因在BHK-21细胞中能稳定持续表达;本试验成功构建了双效表达载体,为Asia I型双效疫苗的研制奠定了基础。