论文部分内容阅读
目的:缺血性脑卒中是脑血管病变导致的一系列神经功能障碍的疾病,现已成为全球人类健康以及影响生存质量的重大疾病隐患,且其发病呈每年递增趋势。由于其狭窄的治疗窗口,使大量患者错过了治疗时机而遗留终身残疾。研究表明,间充质干细胞疗法能促进缺血性脑卒中后的恢复,但机制目前尚不明确。有研究表明细胞焦亡在缺血性脑卒中的神经损伤过程中发挥重要作用。因此,本研究探讨了人胚胎干细胞来源的间充质干细胞()(hES-MSC)移植治疗是否能通过抑制细胞焦亡来减轻急性缺血性脑卒中后的神经损伤。方法:采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)制作大鼠缺血再灌注模型(t MCAO),在缺血1.5小时后,拔出线栓,再灌注24小时。运用量表对手术大鼠进行神经功能评分来判断造模是否成功。选评分在7~12分的大鼠随机分为3组(n=14),另设1组假手术组(n=12),分别经尾静脉注射人胚胎干细胞来源的间充质干细胞(hES-MSCs)、磷酸盐缓冲液(PBS)、以及NLRP3抑制剂(MCC950);为评价治疗效果,在t MCAO后第1、3、6天进行行为学评分(m NSS),第3天利用TTC染色分析脑梗死体积,第7天对Neu N,GFAP,DCX,NLRP3免疫组化标记,对Brd U/Neu N,Brd U/GFAP,Brd U/Iba1进行免疫荧光双染标记。t MCAO后第7天Western blot分析NLRP3,caspase-1,ASC蛋白表达水平,以及使用PCR检测NLRP3,caspase-1,ASC,IL-1β,IL-18 m RNA表达水平。结果:(1)在t MCAO后第3、7天,hES-MSC组行为学评分低于对照组(P<0.05)且梗死体积减少(P<0.05)。(2)hES-MSC促进神经元细胞的存活(P<0.05),并且促进神经元细胞增殖(P<0.05)。(3)hES-MSC抑制胶质细胞的活化及增殖(P<0.05)。(4)hES-MSC抑制NLRP3,caspase-1,ASC m RNA及IL-18,IL-1βm RNA上调(P<0.05),并且减少炎症小体蛋白表达(P<0.05)。(5)NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡加剧缺血性脑卒中后的神经功能损伤,并且促进胶质细胞的活化及增殖(P<0.05)。结论:hES-MSC通过抑制NLRP3炎症小体产生的细胞焦亡来减轻缺血性脑卒中后的神经功能损伤。