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本研究应用RT-PCR、RACE技术从猪肝脏组织总RNA中克隆出猪Dnmt2基因的cDNA序列。分析结果表明,克隆所得到猪Dnmt2 cDNA序列CDS区全长1227bp(Genbank收录号:FJ384441),编码409个氨基酸残基,利用氨基酸序列进行同源比对发现猪Dnmt2蛋白与人、牛和鼠的Dnmt2蛋白相差不大。相似性分析结果表明,与人、牛和鼠的Dnmt2基因氨基酸序列相似性分别为83.83%、87.25%和77.16%。该序列和电子克隆序列contig在CDS内相似性达96.63%。不同物种间Dnmt2的氨基酸同源性介于76.44%～87.25%之间,而本次研究中所测定的猪Dnmt2基因与不同物种的氨基酸同源性介于两个区间,因此我们可以断定本研究所得到的序列就是猪Dnmt2基因cDNA序列。通过Dnmt2基因DNA序列的NJ关系树我们可以看出,聚类图与生物进化一致,这就进一步证实了本研究所得到的序列就是猪Dnmt2基因cDNA序列。本实验所得的猪Dnmt2基因在分子结构上体现了Dnmt2家族的特征。它们具有十个固定排列的DNA甲基转移酶特征模体,这十个模体均呈现较高的保守性,且在第八与第九模体之间存在一个由可变氨基酸组成的TRD。TRD只在Dnmt2家族中发现。应用RT-PCR技术从猪肝脏组织总RNA中克隆出猪Dnmt3b基因的cDNA序列,分析结果表明,克隆的序列cDNA全长2559bp(Genebank收录号:FJ384442),编码852个氨基酸,利用氨基酸序列进行同源比对发现,猪Dnmt3b基因的氨基酸序列与人、牛和鼠的Dnmt3b氨基酸同源性分别为84.76%、79.51%和73.45%。不同物种间Dnmt3b的核基酸同源性介于73.45%～87.75%之间,而本次研究中所测定的猪Dnmt3b基因与不同物种的氨基酸同源性介于两个区间,因此我们可以断定本研究所得到的序列就是猪Dnmt3b基因cDNA序列。通过Dnmt3b基因DNA序列的NJ关系树我们可以看出,聚类图与生物进化一致,这就进一步证实了本研究所得到的序列就是猪Dnmt3b基因cDNA序列。推到的猪Dnmt3b基因蛋白结构域和人、牛、鼠一样,都具有一个半胱氨酸丰富区和一个组氨酸脱酰基化反应的ATRX区,而且还具有一个PWWP结构域。采用荧光定量PCR技术(SYBR GreenⅠ法)对DLY三元杂交猪的心脏、肝脏、脾和小肠组织的差异表达分析显示Dnmt1、Dnmt2、Dnmt3a和Dnmt3b四个基因在这四个组织中均有表达,其中,Dnmt1在小肠表达量最高,肝脏和心脏表达量相差不大,在脾脏的表达量相对较低;Dnmt2在小肠表达量最低,在脾脏表达量最高:Dnmt3a和Dnmt2一样,在小肠表达最低,脾次之,肝脏和心脏相差不大;Dnmt3b也是在小肠表达量最低,其次是肝脏,在脾脏表达最高。