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肿瘤细胞对抗癌药的先天性或获得性耐受是肿瘤化疗面临的主要问题之一。目前已鉴别出某些耐药基因及其产物,其中ABCG2是药物转运体相关的ATP-结合盒(ABC)超家族成员,也称为BCRP、MXR和ABCP,它是ABC结合盒转运体家族最新成员,与P-gp和MRP共为人ABC家族三个主要外排泵。为更好研究ABCG2,本试验构建了ABCG2表达载体,通过转染建立了HEK293/ABCG2多药耐药细胞系并在细胞水平研究其生物学功能。从乳腺癌细胞系MCF-7/MX中提取总RNA,逆转录为cDNA,并以此为模版扩增ABCG2基因,构建有ABCG2因的表达载体;利用脂质体转染方法将表达载体转入胚肾细胞系HEK293细胞。用RT-PCR、间接免疫荧光和Western-blotting检测ABCG2基因在转染细胞系HEK293/ABCG2中的表达;体外细胞毒试验检测细胞系HEK293/ABCG2对米托蒽醌等抗肿瘤药的耐药指数;利用流式细胞术和激光共聚焦分别检测其对罗丹明123和阿霉素外排作用。另外利用siRNA转染HEK293/ABCG2细胞,研究在siRNA作用下ABCG2的表达及耐药状况。试验结果显示ABCG2基因在细胞系HEK293/ABCG2中的mRNA和蛋白水平上表达均明显升高;其对多种抗肿瘤药物有耐受,尤其对米托蒽醌的耐药指数达147.57倍;经1.5、3、4.5和6小时外排,细胞内罗丹明123浓度分别降低了42.25%、66.47%、69.01%和71.80%;激光共聚焦显微镜下观察到细胞水平胞内阿霉素浓度降低。siRNA转染HEK293/ABCG2细胞后96小时内,ABCG2基因的mRNA和蛋白的表达随siRNA作用时间而明显降低,体外细胞毒试验也显示siRNA转染的HEK293/ABCG2细胞与对照siRNA转染的细胞相比,对米托蒽醌和阿霉素的敏感性分别增加了87.0倍和2.3倍。因而得到结论:我们利用转染方法成功构建了稳定表达ABCG2的胚肾细胞系HEK293/ABCG2,并显示出对多种抗肿瘤药物具有耐受性,为今后更好研究ABCG2提供了单一因素的实验模型。