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目的:本研究以胶原酶Ⅶ诱导脑出血大鼠模型为研究对象,运用形态和生化技术,从实验性脑出血后炎性免疫反应的角度,观察及研究不同时间点电针对脑出血大鼠TNF-α、MMP-9表达的影响,探讨不同时间电针治疗急性脑出血的时效关系,从而确定电针治疗的介入时机,为电针临床治疗提供坚实的实验依据。方法:选择健康wistar雄性大鼠56只,体重在200-250g。按体重编号,代入随机数字表分为正常组、模型组、3h电针组和72h电针组,模型组又分为模型1组、模型2组、模型3组、模型4组;每组8只。造模采用0.5u胶原酶Ⅶ注射大鼠尾壳核(前囟后1mm,正中矢状缝向右4mm,深5mm)诱导大鼠脑出血的方法。电针治疗取水沟穴、内关穴(双侧)、三阴交穴(双侧)。3h电针组和72h电针组分别于造模后3h、72h时开始针刺,水沟和右侧大鼠耳朵接一对电极,同侧内关和三阴交接一对电极,连续波,频率120次/min,强度1mA,每次留针30min,每日针刺一次,针刺5次。模型1组和模型2组分别为造模后3h、72h时即刻处死取材,模型3组和模型4组分别为造模3h、72h后+5d处死取材。3h电针组和72h电针组分别于治疗5d后处死取材。以上七组大鼠均用1.0%水合氯醛腹腔注射麻醉,开胸经升主动脉依次灌入生理盐水100ml、4℃预冷的含4%多聚甲醛的0.01mol/L磷酸缓冲液(PBS,pH7.4)400ml。灌毕取脑,置于4%多聚甲醛溶液过夜后固定。以注射点为中心冠状石蜡切片,片厚5μm,切10片,贴于APES防脱片处理的载玻片烘烤备染。HE染色,采用免疫组化法检测肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和基质金属蛋白酶-9(matrixmetallo proteinase-9,MMP-9),在400倍高倍镜下随机取血肿周围5个不重叠视野,计数TNF-α和MMP-9阳性细胞数,统计分析。结果:(1) HE染色结果:正常脑组织未见明显异常改变;模型1组脑组织内见脑出血,神经纤维缠结、断裂,脑组织内未见明显小胶质细胞浸润;模型2组内见脑出血小胶质细胞浸润(少许细胞内出现泡沫)及大量液化性坏死(筛状软化灶)及出血;模型3组脑组织内可见大量小胶质细胞浸润、坏死伴出血;模型4组脑组织内可见液化灶缩小及大量小胶质细胞浸润;3h电针组脑组织内可见泡沫细胞浸润及出血;72h电针组脑组织内可见坏死灶明显缩小、小胶质细胞浸润(2)免疫组化结果:①各组脑组织TNF-α的表达模型组TNF-α表达较正常组均高(P＜0.01),有非常显著性差异;模型2组阳性表达较模型1组和模型4组高(P＜0.01),有非常显著性差异;3h电针组阳性表达较模型2组低(P＜0.01),有非常显著性差异;3h电针组阳性表达较模型3组低(P＜0.05),有显著性差异;72h电针组阳性表达较模型2组低(P＜0.01),有非常显著性差异;72h电针组阳性表达较3h电针组低(P＜0.05),有显著性差异。②各组脑组织MMP-9的表达模型1组MMP-9表达较正常组高(P＜0.05),有显著性差异;模型2组、模型3组、模型4组MMP-9表达较正常组均高(P＜0.01),有非常显著性差异;模型2组阳性表达较模型1组和模型4组高(P＜0.01),有非常显著性差异;3h电针组阳性表达较模型1组高(P＜0.05),有显著性差异;3h电针组阳性表达较模型2组低(P＜0.01),有非常显著性差异;3h电针组阳性表达较模型3组低(P＜0.05),有显著性差异;72h电针组阳性表达较模型2组低(P＜0.01),有非常显著性差异;72h电针组阳性表达较模型4组低(P＜0.05),有显著性差异;72h电针组阳性表达较3h电针组低(P＜0.05),有显著性差异。结论:(1)炎性免疫反应参与了脑出血后血肿周围水肿的形成,可能是脑出血损伤的一个重要因素之一。(2)电针可能通过降低脑出血后脑组织TNF-α和MMP-9的含量,抑制脑出血后由它们诱发的炎性反应,减轻它们对血脑屏障(blood brainbarrier,BBB)的破坏作用,对脑出血后的脑水肿和脑损伤有一定的修复作用。电针治疗脑出血确有一定的疗效。(3) 72h电针治疗的大鼠比3h电针治疗的大鼠TNF-α和MMP-9的表达均较低,说明本实验中72h电针组的治疗效果可能比3h电针组好。