第一部分：耐药和非耐性癫痫患者脑脊液中CLU、PEDF、SOD1的差异表达及其临床意义研究　　目的：在课题组前期从耐药性颞叶癫痫患者脑脊液中筛选出差异表达蛋白的基础上，进一步检验人凝集素(CLU)、色素上皮衍生因子(PEDF)、超氧化物歧化酶1(SOD1)在耐药和非耐药性癫痫患者脑脊液中的表达，探讨其在不同癫痫中的变化规律和临床意义。　　方法：62例癫痫患者按治疗效果分为耐药(n=23)和非耐药性癫痫组(n=29)，分别采集患者脑脊液和静脉血，用酶联免疫吸附测定法检测两组患者脑脊液和血中CLU、PEDF、SOD的变化，并与对照组(n=20)进行比较，讨论其差异表达的临床意义。　　结果：1.与对照组比较，脑脊液中CLU在非耐药和耐药性癫痫组患者中表达均降低，后者更明显，血清中的CLU在耐药组表达较非耐药组明显降低；2.脑脊液中的PEDF在非耐药癫痫组中表达增加，在耐药性癫痫组表达降低，血清PEDF变化与脑脊液中PEDF的表达一致，PEDF表达与性别有关；3.脑脊液中SOD1在非耐药和耐药性癫痫组中表达均降低，后者更明显，血清中SOD1在耐药组表达较非耐药组低，差异有统计学意义(p<0.05)。　　结论：研究结果表明CLU可通过抑制神经细胞凋亡，参与神经胶质细胞增生，对癫痫发作引起的神经元坏死有保护作用，其机制可能与细胞钙稳态有关。PEDF通过抗神经元凋亡，抑制谷氨酸毒性，参与了癫痫发作早期对神经元的保护作用，随着癫痫病程的进展其保护作用受到损伤而降低。SOD1通过抗氧化应激、清除自由基，以及在多条凋亡信号通路中所起的作用影响癫痫的发生及发展。CLU、PEDF、SOD1共同参与了癫痫发病机制的神经元凋亡过程，有共同的中枢神经保护作用，这种作用在癫痫进展过程中逐渐降低。　　第二部分：纳洛酮干预匹罗卡品癫痫大鼠模型的建立及CLU在大鼠海马组织中的表达及其机制　　目的：建立纳洛酮干预匹罗卡品大鼠模型，揭示纳洛酮对CLU蛋白表达的影响，探讨其可能的机制。　　方法：分组：1.匹罗卡品组：150只SD大鼠随机抽取10只作为空白对照组，给予与模型大鼠等量生理盐水(NS)，余140只大鼠建立氯化锂-匹罗卡品模型，随机抽取建模成功大鼠60只，随机分为6组：24h、72h、1W、2W、1month、2month组(n=10/组)，分别在首次痫性发作后24小时、72小时、1周、2周、1月、2月时处死动物留取脑组织标本，空白对照组取平均时间1月时留取标本，用于研究CLU随癫痫发生及发展的表达变化。2.纳洛酮24小时组：上述建模成功大鼠随机抽取30只，随机分为3组：24h(5min)、24h(30min)、24h(60min)组(n=10/组)，分别在首次痫性发作后5min、30min、60min腹腔注射1mg/kg纳洛酮，至24h处死动物留取脑组织标本，用于研究痫性发作后纳洛酮给药时间早晚对CLU表达的影响。3.纳洛酮72h、1W、2W组：建模成功大鼠随机抽取30只，随机分为72h、1W、2W组(n=10/组)，分别在首次痫性发作后5min给予一次纳洛酮(1mg/kg)，以后每日定时腹腔注射一次相等剂量纳洛酮，分别留至发作后第72小时、1周、2周时处死动物留取脑组织标本，将纳洛酮24h(5min)、72h、1W、2W组分别与匹罗卡品24h、72h、1W、2W组比较，研究相同时间点纳洛酮干预前后CLU的表达变化。研究方法：采用免疫组织化学、免疫荧光、蛋白印迹等方法测定各组动物海马组织中CLU蛋白表达，探讨其临床价值。　　结果：1.空白对照组、匹罗卡品24h、72h、1W、2W、1month、2month组中CLU的表达逐渐降低。2.在纳洛酮24h(5min)、24h(30min)、24h(60min)组，CLU表达随给药时间延迟而逐渐降低。3.纳洛酮24h(5min)、72h、1W、2W中CLU表达逐渐降低，分别与匹罗卡品24h、72h、1W、2W组比较，相同时间点纳洛酮组CLU表达较高，差异有统计学意义。　　结论：1.CLU在癫痫发作过程中是一种保护性蛋白，主要通过各种途径的凋亡机制起作用，参与中枢神经系统的自我保护，癫痫早期发作激活机体自身保护机制，后期这种机制受到损害逐渐减弱。2。在氯化锂-匹罗卡品模型中，给予纳洛酮对癫痫发作引起的中枢损伤有保护作用，越早给药保护作用越好。3.纳洛酮干预后CLU表达较干预前增高，提示纳洛酮对匹罗卡品模型中痫性发作有保护作用，但纳洛酮干预并不能阻止病情进展。