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应激(stress)是机体对作用于自身要求的一种非特异性应答,涉及神经内分泌系统和许多其它器官,最初是由内分泌学家H.Selye在20世纪30年代提出,人们观察应激对机体免疫功能影响时发现,应激会导致机体免疫功能低下,其中自然杀伤细胞(NK细胞)杀伤活性也受到抑制。
研究表明,交感神经系统(SNS)对免疫组织具有广泛的支配,交感神经的主要递质是去甲肾上腺素(NE),NE的作用是通过肾上腺素受体(AR)来实现,根据AR与其配体结合特性及功能等差异,将AR主要分为α1、α2和β三大类。α1-AR分为三种亚型,即α1A-、α1B-和α1D-AR,值得重视的是,α1-AR三种亚型功能受体分布的差异,特别是它们在激动剂作用下不同的反应和行为特点,可能是造成其功能差异的原因之一。
在应激时,NK细胞是否存在α1-AR各亚型的表达,NE对NK细胞的早期凋亡是否有诱导作用,又有何种变化,本实验研究不同浓度NE对α1-AR表达以及NK细胞早期凋亡的变化,进而认识神经内分泌系统对免疫系统的影响。
方法:
1、Real-Time PCR检测各实验组NK92-MI细胞α1-AR亚型mRNA的表达水平,并检测同时加入α1-AR阻断剂哌唑嗪后各实验组α1-AR亚型mRNA的表达水平变化。
2、CCK-8法测定不同浓度NE(1×10-12M,1×10-10M,1×10-9M,1×10-8M,1×10-6M)对NK92-MI细胞作用1h后其杀伤活性的影响。
3、流式细胞术检测各实验组NK92-MI细胞早期凋亡率,并检测加入α1-AR阻断剂哌唑嗪或P物质后对NK92-MI细胞早期凋亡的影响。
结果:
NK92-MI细胞存在α1-AR三种亚型的表达,α1-AR阻断剂哌唑嗪能够阻断NE对α1-AR各亚型表达的诱导作用;用终浓度为1×10-12M,1×10-10M,1×10-9M,1×10-8M,1×10-6M的NE作用NK92-MI细胞1h后,在效靶细胞比为4:1时,各浓度NE对NK92-MI细胞的杀伤活性有明显的抑制作用(P<0.05),加入终浓度为1×10-6Mα1-AR阻断剂哌唑嗪能够阻断低浓度NE对NK92-MI细胞杀伤活性的抑制作用;NE对NK92-MI细胞早期凋亡有诱导作用,哌唑嗪及SP能够阻断1×10-8M的NE对NK92-MI细胞早期凋亡的诱导作用(P<0.05)。
结论:
1、NK92-MI细胞表达α1-AR各亚型。
2、应激浓度NE(1×10-8M)对NK92-MI细胞α1-AR各亚型的表达有诱导作用,α1-AR阻断剂哌唑嗪可阻断这种作用。
3、效靶比为4:1时,各浓度的NE(1×10-12M,1×10-10M,1×10-9M,1×10-8M,1×106M)均能降低NK92-MI细胞杀伤活性。
4、1×10-6M哌唑嗪对低浓度NE抑制NK细胞杀伤活性有阻断作用。
5、应激浓度NE(1×10-8M)可诱导NK92-MI细胞早期凋亡,哌唑嗪和SP能够阻断的NE对NK-92MI细胞早期凋亡的诱导作用。
6、α1-AR各亚型参与NE对NK细胞功能的影响。