论文部分内容阅读
目的研究类癌(Carcinoid tumour)和睾丸肿瘤(Testicular tumours)组织中是否存在血管生成拟态(Vasculogenic Mimicry,VM)及相关临床意义,通过观察基质金属蛋白酶2、7、9(Matrix metalloproteinase2、7、9,MMP2、MMP7、MMP9)、组织蛋白酶D(CathepsinD,CathD)、整合素β2(Integrinβ2)、黏着斑激酶(FocalAdhesion Kinase,FAK)及血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growthfactor,VEGF)在类癌和睾丸肿瘤组织中的表达,探讨VM发生相关分子机制。方法1.观察类癌和睾丸肿瘤中VM的分布及临床病理意义收集天津医科大学附属肿瘤医院1992年1月1日～2002年12月20日类癌标本52例和睾丸肿瘤标本40例,患者发病年龄、性别、肿瘤部位、大小及转移等随访资料完整,通过CD34和PAS双重染色观察VM结构并分析VM的分布和临床病理意义。2.分析FAK、Integrinβ2、CathD、MMP2、MMP7、MMP9、和VEGF在类癌和睾丸肿瘤中与VM的关系构建组织芯片,利用血管生成拟态密度(Vasculogenic mimicry density,VMD)、微血管密度(Microvessel density,MVD)计数和免疫组织化学方法分析类癌和睾丸肿瘤中FAK、Integrinβ2、CathD、MMP2、MMP7、MMP9和VEGF表达阳性组和阴性组之间VMD和MVD的差别,VM阳性组和阴性组之间蛋白表达的差别以及表达蛋白之间的相关性。3.实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)检测类癌和睾丸肿瘤中相关基因mRNA的表达,分析它们与VM的关系收集天津医科大学附属肿瘤医院组织库2005年至今新鲜冻存标本类癌组织35例,睾丸肿瘤组织27例,通过阅HE及CD34和PAS双重染色切片后分析VM的分布,利用RT-PCR检测目的基因FAK、CathD、Integrinβ2、MMP2、MMP7、MMP9和VEGFmRNA的表达,从mRNA的水平分析其对VM形成和肿瘤侵袭能力的影响。结果1.类癌和睾丸肿瘤中VM的分布和临床病理意义通过CD34和PAS双重染色证实在类癌和睾丸肿瘤组织中存在VM结构。VM阳性较VM阴性患者生存情况差(类癌:P=0.0017,睾丸肿瘤:P=0.0127);COX比例风险模型分析结果显示:VM是类癌和睾丸肿瘤患者生存的独立预后因素(类癌:危险比[Risk ratio,rr]=3.190,睾丸肿瘤:rr=4.043)。2.FAK、Integrinβ2、CathD、MMP2、MMP7、MMP9和VEGF免疫组化染色结果及VMD、MVD计数差异在类癌组织中,VM阳性组FAK、Integrinβ2、CathD、MMP2表达高于VM阴性组,VEGF表达低于VM阴性组(均P<0.05);FAK、Integrinβ2、CathD、MMP2表达阳性组的VMD高于表达阴性组,VEGF表达阳性组的VMD低于阴性组(均P<0.05);CathD、MMP2、VEGF表达阳性组MVD高于表达阴性组(均P<0.05);FAK和Integrinβ2、CathD和MMP2的表达呈正相关。在睾丸肿瘤中,VM阳性组FAK、CathD、MMP2、MMP7表达高于VM阴性组(均P<0.05);FAK、CathD、MMP2、MMP7表达阳性组的VMD高于阴性组(均P<0.05);FAK、CathD、MMP2、MMP7、VEGF表达阳性组MVD高于阴性组(均P<0.05);FAK和CathD,CathD和MMP2、MMP7的表达呈正相关。3.RT-PCR检测类癌和睾丸肿瘤中相关基因mRNA的表达RT-PCR结果显示类癌组织中,VM阳性组FAK、Integrinβ2、CathD和MMP2mRNA表达均高于VM阴性组,VEGFmRNA表达低于VM阴性组(均P<0.05);睾丸肿瘤中,VM阳性组FAK、CathD、MMP2和MMP7mRNA的表达均高于VM阴性组(均P<0.05),与免疫组化结果趋势一致。结论1.类癌和睾丸肿瘤中均存在VM。VM是肿瘤细胞为适应环境而产生的一种独特的血液供应模式,与内皮依赖性血管并存于肿瘤组织内。存在VM的患者易发生远处转移,预后差。VM是评价患者预后重要的独立因素。2.在类癌组织中,FAK、Integrinβ2、CathD、MMP2可能参与了VM结构的形成,而FAK、Integrinβ2、CathD、MMP2和VEGF可能参与肿瘤血管生成。3.在睾丸肿瘤中,FAK、CathD、MMP2、MMP7可能参与了VM形成的调控,而FAK、CathD、MMP2、MMP7和VEGF可能与肿瘤血管生成的分子调控有关。