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大量事实证明,有机锡污染是导致海洋腹足类动物发生性畸变的主要原因,但有机锡致性畸变的机制尚未完全清楚。多数人认为,有机锡抑制了正常螺体内细胞色素P450芳香化酶的活性而导致性畸变现象产生。结合细胞色素P450酶系在生物体内所起的重要作用,本文决定以此为切入点,以分布最广、性畸变现象最普遍、特征最明显的疣荔枝螺为研究对象,对其细胞色素P450酶系进行生化水平的部分研究,同时也深入到分子水平进行探索,以期在更深的层次对性畸变现象做出阐释。 首先,本实验从雄性、雌性和性畸变疣荔枝螺内脏团制备得到微粒体酶液,对细胞色素P450酶系三个主要成分:细胞色素P450、细胞色素b5、NADPH-细胞色素P450还原酶进行测定,结果发现性畸变螺的细胞色素b5含量与雌、雄螺存在显著差异,通过比较还发现性畸变螺的细胞色素P450含量、NADPH-细胞色素P450还原酶活性与雄螺更接近。说明性畸变螺不但在表型与雄螺相象,而且体内P450酶系的部分成分也更接近于雄螺。 其次,通过生物软件分析出CYP19的氨基酸保守序列,自行设计简并引物,分别以雌疣荔枝螺总RNA和基因组DNA为模板,进行简并RT-PCR及简并PCR,将所得产物进行克隆、测序,结合生物信息学中BLAST序列比对,对结果进行分析。结果显示RNA及基因组DNA均含有一长约746bp的未曾报道过的序列,它与Genbank现已公布的细胞色素P450相关性较小,而与部分海洋鱼类反转录酶相关性较大,且与斑马鱼DNA序列相似。另外,还根据昆虫CYP4家族的特异性氨基酸序列及P450超家族的共同特征序列,采用另一对简并引物,同样进行有关研究,结果显示:疣荔枝螺不同组织的RNA中都含有一长468bp左右的序列,这同样是一段新序列,与部分物种的CYP4存在一定的相关性,可能在螺体内起一定重要的作用,但具体功能有待进一步研究。展望通过相应的分子生物学技术,如在此基础上用cDNA末端快速扩增法（RACE）获得其全长cDNA序列,再进行表达实验等,可以对其功能进行深入研究。 细胞色素P450酶系是一种普遍存在于动、植物中的代谢酶系,催化多种反应,在生物体内的生理生化功能中发挥着重要作用。本文在生化水平对疣荔枝螺细胞色素P450酶系进行研究,所得结果能为从细胞色素P450角度解释疣荔枝螺性畸变现象提供基础。同时也从疣荔枝螺RNA及基因组DNA得到有关的基因序列,为进一步探讨该基因在螺体内的作用打下基础,也为海洋软体动物的分子生物学研究提供参考。