鼠尾草精油纳米脂质体对金黄色葡萄球菌生物膜的控制

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从植物中提取的鼠尾草精油,天然安全无毒,具有较浓郁的香气,能赋予食品特殊的香气。除此之外,鼠尾草精油还具有很好的杀菌效应,是一种有待开发的天然杀菌剂,在食品行业中有较好的应用前景。但因其主要抗菌成分乙酸芳樟酯、芳樟醇等物质易挥发,若直接用于食品防腐会影响其抗菌效果。因此,本实验致力于研究鼠尾草精油纳米脂质体的制备,将鼠尾草精油包裹于纳米脂质体中,利用金黄色葡萄球菌生物膜释放的α-毒素的成孔特性,对脂质体刺激响应,靶向释放鼠尾草精油。本论文将鼠尾草精油纳米脂质体应用在易感染金黄色葡萄球菌的乳制品加工器具表面,从而实现鼠尾草精油的活性成分缓慢释放,并始终保持环境所需的抗菌浓度,达到所需的抗菌效果。本研究得到的主要结果如下:  (1)本实验首先对鼠尾草精油的主要成分进行了测定,GC-MS实验结果显示,鼠尾草精油的主要成分为乙酸芳樟酯(74.562%)。随后本实验研究了鼠尾草精油的抗菌性能及其抗菌机制。实验结果表明,鼠尾草精油对实验所选的七种食源性病原菌都具有较好的抑菌和杀菌效果,鼠尾草精油对七种参试菌的最小杀菌浓度在0.5~1 mg/mL之间,对其最小抑菌浓度在0.25~0.5 mg/mL之间。并且作用时间越长,细菌死亡率越高,当鼠尾草精油作用时间达到2 h时,金黄色葡萄和大肠杆菌的死亡率均达到99.999%以上。在精油杀菌机制研究中,SEM和TEM图显示,经过精油处理之后,细菌细胞壁和细胞膜有一定程度的溶解、凹陷、变形,细胞的形态、结构等遭到破坏。随着鼠尾草精油浓度的增加,其相对应的260 nm处的吸光度值逐渐增加,细胞膜的通透性越强,胞内ATP总含量明显减少,并且细菌胞内核酸含量大量降低。  (2)本实验对鼠尾草精油的抗金黄色葡萄球菌生物膜的性能进行了研究。ESEM结果显示,鼠尾草精油对纤维膜上金黄色葡萄球菌生物膜有较好的清除效果。在鼠尾草精油对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制和清除实验中,MTT染色法和平板菌落计数法展现了较为一致的实验结果。抑制实验结果表明当鼠尾草精油浓度达到2 mg/mL时,不锈钢片表面并无生物膜生成,鼠尾草精油浓度达到3 mg/mL时,塑料和玻璃表面生物膜的形成被完全抑制了。在清除实验中,8 h时,8 mg/mL浓度的精油对不锈钢、塑料片和玻璃片表面的生物膜清除率均达到了99.99%以上。  (3)本实验采用薄膜超声波分散法制备了鼠尾草精油纳米脂质体,并对其理化性质进行了测定。实验测定结果显示,鼠尾草精油纳米脂质体粒径为188.5±6.55 nm,PDI为0.189±0.021,表面Zeta电位为-48.38±0.32,浊度为824±32.5 NTU,pH值为6.23±0.02,包封率为46.51±0.67%。鼠尾草精油纳米脂质体的AFM、TEM和SEM观察结果皆表明脂质体为球形,分散均匀,为纳米级脂质,具有较高的稳定性。  (4)GC-MS分析和平板菌落计数法验证了金黄色葡萄球菌释放的成孔毒素能有效的释放脂质体中包裹着的鼠尾草精油,从而达到靶向杀菌的效果。最后,本实验证实了鼠尾草精油纳米脂质体对附着在乳制品器具表面的金黄色葡萄球菌生物膜均具有良好的抗生物膜性能,第15天时,不锈钢、塑料和玻璃表面生物膜的清除率分别达到99.89%、99.993%和99.81%。另外,鼠尾草精油纳米脂质体对金黄色葡萄球菌生物膜有长效抑制效果,鼠尾草精油作用第3天乳制品器具表面出现金黄色葡萄球菌生物膜二次污染,而第6天时,鼠尾草精油纳米脂质体对金黄色葡萄球菌生物膜仍具有较好的抗生物膜性能。
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