青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)致病力分化的研究

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通过对青枯病不同发病时期不同部位的番茄、花生和生姜植株的青枯雷尔氏菌进行分离,从番茄青枯病发病初期的病株根部和青枯病发病后期的病株茎中部分离到的青枯菌中除了强致病力的菌株外,还分离到少量无致病力的菌株,从生姜病株的茎上分离到的青枯菌均为无致病力的菌株。通过生防菌BC-0711和青枯雷尔氏菌1:1共培养试验,表明生防菌BC-0711对供试青枯雷尔氏菌均有抑制作用,但是对不同菌株的抑制率有所差异,生防菌对Rs466菌株的抑制率仅为4.6%,对Rs91和Rs1447的抑制率较高,分别达到78.3%和79.9%,对其他菌株的抑制率为43.5%-59.6%。对强致病力青枯雷尔氏菌Rs91和Rs1100连续5代的继代培养后发现Rs91未出现致病力分化,而Rs1100在第五代时出现致病力分化。生防菌BC-0711对Rs91连续处理3代后,未出现致病力分化,对Rs1100第一次处理后即出现无致病力菌株的分化。通过Tn5转座子随机插入青枯雷尔氏菌(Rs91)获得1004株转座子随机插入突变株,经过在TTC平板上的形态特征筛选,其中有13株突变株具有无致病力青枯雷尔氏菌的形态特征。对其中5株无致病力突变株进行反向PCR测序和序列比对,分析鉴定出这5株青枯雷尔氏菌突变株的插入位点在phcA基因和phcS基因上,经番茄盆栽苗致病力检测,确定为无致病力菌株。比较了这5株突变株与原始菌株的生理生化特性,这5株突变株的生长速率和相对胞外多糖含量显著低于Rs91,但最适pH值和最适温度未发生变化。5株突变株TTC液体培养基上清液在紫外-可见分光光度计上于400-450nm波长上吸收峰的扫描结果,通过聚类分析发现这5株突变株与原始菌株Rs91分别聚为不同的三类,即Rs91为第I类,phcA基因突变株为第II类,phcS基因突变株为第III类。
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