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目的：建立人胎大脑神经元的体外缺血模型，为研究急性缺血缺氧性脑损伤的细胞和分子机制提供实验基础，并应用上述模型就纳洛酮对神经元缺血性损伤时保护作用的分子机制进行研究。方法：应用无血清原代培养人胚胎大脑神经细胞的方法，经神经微丝染色证实为富含神经元的混合培养细胞。采用普通培养设备和自制密闭容器对神经元进行缺氧结合无糖处理，建立人胎大脑神经元的体外缺血模型，取培养上清液于缺氧前及缺氧后不同时点测定pH、PCO2、PO2、乳酸脱氢酶（LDH）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、谷氨酸浓度；应用四甲基偶氮唑盐（MTT）测定缺氧前后细胞活力的变化；并提取细胞内总RNA，应用逆转录聚合酶链反应扩增后，观察缺氧前后细胞内NSE、干细胞因子及其受体c-kit（SCF／c-kit）表达量的变化。基于上述实验，将缺氧细胞随机分组，于缺氧处理开始时给予不同浓度的纳洛酮，观察细胞外液MTT值、LDH、NSE、谷氨酸浓度和NSE、SCF／c-kit表达量的变化。结果：①采用现有方法，可使细胞外液PO2降至29．4～34．1mmHg（P＜0．01），pH无明显变化，PCO2虽有显著性升高（P＜0．05），但仍波动在正常生理范围（38．6～43．2mmHg），达到缺氧目的。②缺氧1hr后上清液中LDH、NSE、谷氨酸浓度即可见明显升高（P＜0．01），细胞存活率显著降低（P＜0．01），缺氧3hr和5hr组与对照组比较虽有明显升高（P＜0．01），但其升高程度与缺氧1hr组无显著性差异（P＞0．05）。③缺氧1hr组给予不同浓度纳洛酮后，随纳洛酮浓度的增加，细胞外液LDH、NSE、谷氨酸浓度逐渐降低，细胞存活率逐渐增高（P＜0．05），至10μg／ml时恢复至对照水平。④轻度缺氧（30min）后即刻，可见NSE、SCF／c-kit基因表达量明显升高（P＜0．01），其中SCF表达量在24hr 天津医科大学硕士研究生论文 中文摘要 内呈双峰分布；给予不同浓度纳洛酮后，随药物浓度的增加，各组表达量峰值 降低，并且延迟出现，与对照组比较具有显著性差异（P＜0刀 1）。结论：结果 表明按照本实验方法，缺氧for即可达到损伤目的，可以作为神经元缺氧损伤 的体外模型，用于缺血性脑损伤细胞和分子机制的研究。纳洛酮对体外培养神 经细胞的缺氧损伤具有保护作用。本实验表明其保护机制与抑制兴奋性氨基酸 的神经毒性及调节多种保护性因子的表达有关。