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目的: (1)预测并鉴定沙眼衣原体(Ct) Tarp蛋白的B细胞表位，为深入研究Tarp蛋白的生物学特性及其表位疫苗的研制打下基础。 (2)制备沙眼衣原体(Ct) Tarp蛋白免疫优势B细胞表位的单克隆抗体，为进一步验证该表位的活性功能奠定基础。 (3)研究沙眼衣原体(Ct) Tarp免疫优势B细胞表位对雌性BALB/c小鼠生殖道Ct攻击的免疫保护效应。 方法: (1)利用生物信息学软件综合分析、预测筛选E血清型Ct Tarp蛋白的B细胞表位，获得六个潜在目的表位。将人工合成的表位肽段与弗氏佐剂完全乳化，经背部皮下途径分多点注射BALB/c小鼠（100μg/只/次），间隔2周，共免疫3次。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测免疫小鼠血清中特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a，以及阴道分泌物中特异性sIgA抗体;进一步采用间接免疫荧光实验、免疫沉淀实验和Western blot验证表位肽免疫血清IgG与内源性Tarp蛋白的结合能力。 (2)利用杂交瘤抗体技术制备Tarp免疫优势B细胞表位的单克隆抗体(mAb)，ELISA法筛选阳性克隆，并测定单克隆抗体的效价;同时，采用免疫沉淀和Western blot检测单克隆抗体与Tarp蛋白的结合能力，进一步采用竞争性ELISA检测mAb与天然Tarp蛋白和Tarp免疫优势B细胞表位肽的竞争性结合能力。 (3)将人工合成的Tarp免疫优势表位肽段经弗氏佐剂完全乳化后，经背部皮下途径分多点注射BALB/c小鼠，同时设置灭活Ct免疫阳性对照组和PBS免疫阴性对照组，采用隔周免疫程序，共免疫3次。采用体外中和实验检测表位免疫血清中和Ct感染HeLa229细胞的活性。每组小鼠末次免疫后1w，分别皮下注射醋酸甲羟孕酮，1w后，以20μL(1x106IFU/mL) Ct经生殖道途径攻击小鼠。感染后，每天观察小鼠外阴炎症、生殖道Ct清除情况，以及生殖道组织病理切片等分析判断Tarp免疫优势表位肽段免疫后对小鼠生殖道的保护效应。 结果: (1)筛选并鉴定了Tarp蛋白的一个免疫优势B细胞表位F4(aa171-186)，该表位可以刺激小鼠产生较高水平的血清特异性IgG抗体，免疫后第4周和第6周，F4合成肽组血清特异性IgG抗体水平与其他组统计学比较，均值分别为0.27±0.04、0.62±0.05，差异均具有统计学意义(F=20.93，P＜0.05、F=46.66，P＜0.05);且末次免疫后2周检测小鼠血清中IgG亚类水平，结果分析显示，血清抗体亚类以IgG1为主，F4合成肽组血清特异性IgG1抗体与其他组比较，均值为0.24±0.03，差异具有统计学意义（F=24.43，P＜0.05）;同时，F4合成肽组阴道分泌物经ELISA分析显示，存在分泌物特异性sIgA抗体，免疫后第6周，F4组小鼠阴道分泌物（0.50±0.04）中特异性sIgA抗体水平与其余组比较，差异具有统计学意义(F=39.21，P＜0.05)。 (2)间接免疫荧光、免疫沉淀和Western blot检测结果显示，F4表位肽免疫血清IgG可特异性识别内源性Tarp蛋白。 (3)制备了Tarp蛋白F4表位肽的单克隆抗体，该mAb能较好的特异性结合Tarp蛋白免疫优势B细胞表位F4(aa171-186)合成肽，与PBS组进行比较，均有显著性差异(F=26.10，P＜0.05)，其效价为1∶16。免疫沉淀和Western blot检测结果显示，该段表位mAb可特异性识别天然Tarp蛋白。竞争性ELISA结果进一步显示，F4表位肽可与天然内源性Tarp蛋白竞争性结合该mAb。 (4)血清体外中和实验证实，在Ct∶血清=1∶1时，实验组（鼠抗F4血清孵育）与阴性对照组（鼠抗PBS血清孵育）比较，差异具有统计学意义(F=19.10，P＜0.05);当Ct∶血清=1∶2时，实验组未检出Ct IFU，与阴性对照组比较，差异具有显著性(F=46.66，P＜0.05);在Ct∶血清=1∶4时，实验组未检出Ct IFU，与阴性对照组比较，结果显示，具有显著性差异（F=38.22，P＜0.05）;结果提示，F4表位肽免疫血清能有效地抑制Ct感染HeLa229细胞，其血清抗体IgG具有明显的体外中和活性。BALB/c小鼠经皮下免疫F4表位肽后再经阴道途径感染Ct，与PBS免疫组相比，F4多肽组和灭活Ct组生殖道炎症持续时间缩短，病理切片显示炎症程度有所减轻。在Ct感染后30天，F4多肽组和灭活Ct组阴道分泌物中未检测到Ct，PBS组阴道分泌物中Ct IFU数与其余两组比较，差异具有统计学意义（F=81.08，P＜0.05），故F4表位肽对生殖道Ct感染具有一定的免疫保护效应。 结论: (1)获得了Ct Tarp蛋白的一个免疫优势B细胞表位F4(aa171-186)，为深入研究Tarp蛋白的生物学特性及表位疫苗研制奠定基础。 (2)该表位肽具有免疫原性、抗原性和中和活性，即可刺激小鼠机体产生特异性血清抗体IgG，且该抗体能与天然Tarp蛋白结合，并且具有一定的体外中和活性。 (3)获得了Tarp蛋白免疫优势B细胞表位F4(aa171-186)的单克隆抗体，为进一步验证该表位的活性功能奠定了基础。 (4) Tarp蛋白免疫优势B细胞表位F4（aa171-186）免疫后可适当减轻小鼠生殖道Ct感染炎症程度和缩短维持时间，具有一定的免疫保护作用。