论文部分内容阅读
自身免疫调节因子（Autoimmune regulator，Aire）基因的缺失或突变将导致由自身免疫应答介导的、以多器官损伤为特征的自身免疫性多腺体综合症1(autoimmune polyglandular syndrome type1，APS1),又称APECED病，其临床表现为自身免疫性多内分泌腺病-念珠菌病-外胚层营养不良的三联体综合征。在中枢免疫器官，Aire是一种高表达在胸腺髓质上皮细胞（Medullary thymicepithelial cell，mTEC）的转录因子。其通过调控mTEC上外周组织限制性抗原（Tissue restricted antigens，TRAs）的表达，清除自身抗原反应的T细胞克隆，维持中枢免疫耐受，防止自身免疫的发生。在外周的淋巴器官和组织中，Aire主要表达在树突状细胞（Dendritic cell，DC）细胞中，但其在DC细胞中产生的作用和意义尚不明确，另外APECED病人对念珠菌显著易感及其发病机制同样不清楚。由于DC细胞通过作用于CD4+T细胞,在外周耐受的维持和免疫应答的调控过程中发挥重要的作用。因此，我们推测表达在DC细胞的Aire是否可能通过影响CD4+T细胞亚群的分化，诱导效应性CD4+T耐受而参与外周耐受和免疫应答呢？基于以上背景和推测，为了研究表达Aire的DC细胞对CD4+T细胞的影响，我们进行了两方面的研究。1.我们通过transwell的方式将脾细胞来源的CD4+T细胞分别与转染Aire-pEGFPC1的Aire细胞和做为对照的pEGFPC1细胞进行共培养，研究表达Aire的DC是否可以通过分泌细胞因子的方式影响CD4+T细胞亚群的分化；2.我们将过表达Aire的DC2.4细胞与WT小鼠和链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病模型小鼠STZ-T1D来源的脾细胞混合培养，研究过表达Aire的DC细胞对自身反应性CD4+T细胞耐受状态的影响。第一部分：过表达Aire的DC细胞对CD4+T细胞亚群分化的影响和机制1.过表达Aire的DC2.4细胞对CD4+T细胞亚群影响的研究结果证明过表达Aire的DC2.4细胞能够促进幼稚型CD4+T细胞向Th1和Th17亚群分化。2.过表达Aire的DC2.4细胞对CD4+T细胞亚群影响的机制结果显示过表达Aire的DC2.4细胞通过促进IL-12表达从而上调Th1的产生，通过IL-6，TGF-的表达上调促进Th17的产生。3. Aire影响DC2.4细胞相关细胞因子表达的机制结果显示Aire通过增强ERK和P38信号通路的活化促进细胞因子IL-12,IL-6,TGF-的产生。第二部分：过表达Aire的DC细胞对外周CD4+T细胞耐受的影响和机制1. Aire对DC2.4细胞耐受相关分子的影响结果显示Aire可以抑制LPS对DC细胞的活化作用，同时促进DC细胞上T1D相关TRAs的表达。2.过表达Aire的DC细胞对CD4+T细胞耐受状态的影响结果显示转染Aire的DC细胞通过促进STZ-T1D小鼠CD4+T细胞的凋亡，诱导STZ-T1D和WT小鼠CD4+T细胞功能性失活，上调其脾细胞中耐受性分子的表达，从而使CD4+T细胞维持耐受状态。3.过表达Aire的DC细胞诱导CD4+T细胞功能性失活的机制结果显示转染Aire的DC细胞通过降低STZ-T1D和WT小鼠CD4+T细胞中Ca2+、p-ERK的产生，进而抑制其TCR信号通路，诱导STZ-T1D小鼠CD4+T细胞耐受。4.经过表达Aire的DC细胞诱导后的CD4+T细胞对小鼠T1D发生的影响结果显示Aire细胞诱导的脾细胞可以延缓STZ诱导小鼠T1D的发生。本研究的意义在于，探讨了Aire在外周淋巴器官和组织的DC细胞中表达的作用和机制。研究证实Aire可通过调节DC细胞细胞因子的分泌促进Th1和Th17的分化；并且可以诱导自身反应性CD4+T细胞的功能性失活和凋亡。研究提示Aire可能在维持自身耐受的同时，预防病原菌的感染，为APECED病人自身免疫病发生与对念珠菌显著易感并存提供合理的解释。