论文部分内容阅读
基于酶解辅助提取的高效性、条件温和以及双水相萃取的分层效应、选择性等特点建立了一种快速、有效、环保的的生物提取分离技术?酶解耦合双水相萃取技术,并将其应用菟丝子黄酮、淫羊藿黄酮的选择性提取。主要研究内容如下:(1)实验中将酶解耦合双水相萃取技术应用到菟丝子黄酮类成分的提取中。采用28%(w/w)乙醇-18%(w/w)硫酸铵双水相体系作为最佳萃取体系,将酶解与双水相体系(aqueous two-phase system,ATPS)结合,发现利用加酶后提取效果明显优于未使用酶的。通过研究酶种类对黄酮提取率的影响,发现与单一酶提取效果相比,采用5%(w/w)纤维素酶和5%(w/w)蛋白酶构成的复合酶的提取效率更显著。另外,研究发现不同产地菟丝子的品质有所差异。与山东泰安产地的菟丝子黄酮相比,虽然内蒙古产地的菟丝子黄酮中金丝桃苷的含有量较少,但是紫云英苷、槲皮素的含量相对较多。实验中以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除率为指标,评估菟丝子黄酮的抗氧化活性。菟丝子黄酮的抗氧化活性较强。菟丝子黄酮清除自由基能力与其浓度呈密切相关。通过对菟丝子黄酮清除DPPH自由基的动力学研究,发现符合一级反应动力学。与加热回流溶剂萃取(heated reflux solvent extraction,HRSE)和超声辅助萃取(ultrasounic-assisted extraction,UAE)法对比,本方法的黄酮提取率高,达到18.75 mg/g。该方法成本低廉、操作简易、实验条件温和,是一种选择性好、绿色环保的提取分离方法。(2)将采用28%(w/w)乙醇-18%(w/w)硫酸铵双水相体系萃取淫羊藿提取物中的淫羊藿苷,得到淫羊藿苷的含量为2.95%。随后,将酶解法与双水相萃取技术相耦合应用于淫羊藿总黄酮生物转化及产物提取中。实验中采用果胶酶水解淫羊藿总黄酮,考察了影响酶解转化的因素,包括酶的添加量、酶解时间、酶解温度。另外,实验对酶学性质进行考察,发现葡萄糖对酶的酶解能力有一定的抑制作用;有机试剂乙醇会使酶的活性丧失;预先向样品溶液中加入适量的硫酸铵会提高酶的活性,促进淫羊藿总黄酮的水解。采用最优工艺条件:酶用量12 mg、底物浓度为1.07 mg/mL,预先酶解液中加入0.8 g硫酸铵、酶解时间3 h、酶解温度52.5℃,淫羊藿总黄酮中淫羊藿苷的转化率达到99.0%以上。另外,淫羊藿总黄酮中其他未知黄酮也发生了水解转化,具体的转化规律还需要进一步的研究。