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硒是生命活动的必需元素,在人类防癌抗癌、延缓衰老、提高机体免疫力、预防和治疗心血管疾病和克山病等方面都发挥着重要作用。硒的存在形式有无机硒和有机硒两种,其中有机硒毒性低、副作用小,能够更好地发挥硒的生理活性。有机硒主要包括硒多糖、硒氨基酸、硒蛋白和硒核酸等,其中硒多糖不但具有无机硒的多种活性,还具有多糖的各种生理功能,且硒多糖的活性普遍高于硒和多糖。某些食用菌能将硒从环境中的无机形式转化为体内有机形式,而灵芝的硒转化率又为食用菌之冠。研究证实灵芝硒多糖是一种具有广谱的免疫促进剂,具有防癌抗癌、调节免疫功能、延缓衰老、抗感染、抗辐射等生理作用。目前对硒多糖的抗肿瘤作用机制的研究,大多是从对单个蛋白作用影响或某条作用途径的角度进行研究,然而这种方式无法满足后基因组时代的要求。因为硒多糖对肿瘤细胞的作用往往是多方面、多途径的,涉及到多种蛋白质的表达;而且多种蛋白质的参与是交织成网络的,或平行发生,或呈级联因果;同时,硒多糖在执行生理功能时蛋白质的表现是多样的、动态的,并不象基因组那样基本固定不变。因此要对硒多糖的抗肿瘤作用机制有全面和深入的认识,必然要在整体、动态、网络的水平上对蛋白质进行研究。本实验首先对灵芝菌丝进行加硒发酵培养,然后提取其中的硒多糖,并将其作用于MCF-7细胞20h、44h、68h后,用MTT法检测抑制率,结果显示灵芝硒多糖作用MCF-7 24h小时后,细胞开始出现凋亡,凋亡抑制率达到25.89%。延长作用至72小时,最高抑制率可达80.53%,IC50值为0.158μM。利用比较蛋白质组学方法,通过双向电泳发现用灵芝硒多糖处理的MCF-7细胞,在培养48h后表达的蛋白与对照组细胞的蛋白有明显区别。利用PDQuest软件分析,取5个差异较大的蛋白质,切点,后胶内酶切的方法对这5个蛋白点进行MALDI-TOF MS/MS串联质谱分析。结果显示这5个蛋白分别是膜连蛋白Annexin A2、角蛋白Keratin 8、原肌球蛋白Tropomyosin 3、热休克蛋白Heat Shock protein 90和酪氨酸3单加氧/色氨酸5单加氧酶激活蛋白Tyrosine 3/ tryptophan 5 -monooxygenase activative protein,资料显示这5个蛋白对肿瘤的发生、发展都有着重要的作用和影响,以蛋白质组学的角度探讨灵芝硒多糖发挥其抗癌活性后引起MCF-7细胞中哪些蛋白发生了变化,从而解释灵芝硒多糖的抗癌、抑癌的真正机理,为抗癌药物的研发提供理论依据。