家蚕免疫中循环血细胞数目相关研究

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家蚕的血液循环系统是开放式循环系统,所有的内部组织和器官均浸浴其中。当病原物攻破体壁、肠道和气管等物理屏障后,首先面对的是血液。血液是先天免疫的主要场所。家蚕先天免疫包括体液免疫和细胞免疫。吞噬、包囊和黑化等重要先天免疫应答机制都与循环血细胞密切相关。然而,免疫过程中的循环血细胞数目变化至今没有详细调查。本文调查了大肠杆菌注射后家蚕幼虫血细胞数目、造血器官大小以及造血调控因子的变化和影响等,结果如下:观察5龄起蚕到上簇吐丝免疫攻击后幼虫循环血细胞数目和造血器官大小。结果显示,所有幼虫注射细菌后血细胞数目立即下降,然后上升达到一个峰值,再逐渐下降回复正常。血细胞数目达到峰值在前半龄期多为注射后6小时,在后半龄期多为注射后12小时。随着幼虫生长发育血细胞数目免疫攻击后达到峰值的时间推迟。注射细菌后造血器官在5龄初中期有稍微增大然后恢复正常的现象,在5龄中后期变化不明显,游走期免疫攻击有促进造血器官快速解离的作用。血细胞数目与造血器官大小在免疫攻击后变化趋势不完全一致。非处理幼虫血细胞数目在5龄起蚕达到一个高峰,然后随生长逐渐下降至5龄6天保持一个平稳状态至游走期又出现小幅升高;但造血器官随幼虫生长逐渐增大到5龄6天达到最大,龄末明显变小直至吐丝期完全解离。血细胞数目不随造血器官增大而增多。因此,在正常和免疫条件下5龄幼虫循环血细胞数目与造血器官大小不是直线正相关关系。调查生产实用蚕品种菁松、皓月、湘辉、芙蓉、7532、932等纯种及其形成的中日一代杂交种的血细胞数目显示,品种间血细胞数目有显著差异,夏秋用种明显高于春季用种,杂交种的血细胞数目与高值亲本的相似。推测血细胞数目与家蚕健康性有关。分析5龄起蚕血细胞的基因表达显示,两广二号中造血调控基因BmBCFI、BmUsh和BmLz的表达量显著高于皓月。说明这些造血调控因子表达量与家蚕的血细胞数目和健康性一致。检测免疫攻击后血细胞数目最低、最高和回复正常时期,发现BmBCFI、BmUsh与BmLz的表达量,不管是在5龄起蚕还是在5龄4天都是在血细胞数目高峰期显著升高。表明这些造血调控因子与免疫攻击下的血细胞数目增加密切相关。干涉实验显示,降低BmBCFI基因表达,浆细胞和总的血细胞数目发生了减少;降低BmUsh和BmLz基因表达,拟绛色细胞数目出现了减少。初步显示了免疫中这些造血调控因子对血细胞的特异作用。此外,降低BmBCFI和BmUsh基因的表达,toll途径上的cactus基因和imd途径上的relish基因表达显著下调。这直接说明造血调控因子BmBCFI和BmUsh与免疫有关。
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