水稻条纹病毒与水稻蛋白质互作研究

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水稻条纹叶枯病是东亚稻区水稻重要病害之一,对水稻产量构成严重影响。迄今,关于其病原—水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)编码的蛋白与水稻寄主蛋白之间的互作关系以及病毒编码蛋白之间的互作关系尚无系统研究报道。因此,开展RSV互作研究对于研究病毒致病机制具有重要参考价值。本论文采用酵母双杂交(yeast two-hybird system,YTHS)和双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术研究RSV编码蛋白与水稻寄主蛋白间的互作以及RSV编码蛋白间的互作,结果表明:第一、RSV编码蛋白可与多个寄主蛋白相互作用。其中,以RdRp为诱饵筛选出的水稻寄主蛋白最多,如:磷酸核酮糖激酶(phosphoribulokinase,chloroplastic-lke,PPKase)、光合系统I中心亚基II(photosystem I reaction center subunit II,chloroplastic-like,PSAD2)、细胞分裂素激动蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、NADH激酶(NADH kinase-like,NADK3)等蛋白;第二、水稻寄主蛋白可与多个RSV蛋白互作。如:1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亚基(ribulose-1,5 bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit,RBCL)几乎与所有RSV蛋白均有互作,NADH脱氢酶与RSV P2、MP均有互作;第三、多个水稻寄主蛋白可与同一病毒蛋白互作。例如:脱落酸受体PYL8-like、翻译起始因子4A均与RSV P2互作,poly(A)结合蛋白、光捕获复合体均与RSV P4互作。并采用BiFC技术进一步验证了植物蛋白与病毒蛋白的互作。RSV编码蛋白之间的互作研究结果表明:RSV RdRp-1、-2、-3、-5、P2、Pc2C、CP、MP均存在自身互作;P2与RdRp-1和-2,P3与RdRp-2,P2与RdRp-5,P2与Pc2C均能双向互作;而P2与RdRp-4、P4、MP;Pc2C与RdRp-1,P2与RdRp-4、P2与P3均只存在单向互作。基于互作研究结果,我们绘制RSV病毒蛋白互作网络图,表明RSV P2是一个很重要的蛋白,可与多个RSV蛋白互作。
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