动物源产ESBL大肠杆菌的分离鉴定与耐药特性研究

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近年来,由于产ESBL(Extended-Spectrumβ-Lactamases)大肠杆菌的不断出现,细菌对这类药物的耐药性问题日益凸显出来。本研究对我国4个省份的鸡、猪、牛养殖场采集泄殖腔拭子、新鲜粪便,进行产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的大肠杆菌的分离鉴定以及对12种临床常用抗菌药物的药敏试验,并对分离到的菌株采用PCR方法检测β-内酰胺类相关的6种耐药基因,最后进行脉冲场凝胶电泳和多位点序列分型分析其亲缘关系。具体试验结果如下:
  1.对我国4个省份鸡、猪、牛养殖场405份样品进行分离鉴定:包括鸡泄殖腔拭子155份,猪粪便145份,牛粪便105份。共分离得到344株大肠杆菌,其中鸡源140(90.3%)株、猪源122(84.1%)、牛源82(78.1%)。采用双纸片确认法在344株大肠杆菌中检测出260株ESBL菌,检出率为75.6%,其中鸡源78.6%(110/140)、猪源75.4%(92/122)、牛源70.7%(58/82)。
  2.不同动物源产ESBL大肠杆菌的耐药特性研究:所有分离鉴定的产ESBL大肠杆菌对头孢氨苄耐药率高达100%。其中鸡源产ESBL大肠杆菌对阿莫西林、头孢噻肟、头孢吡肟、庆大霉素、新霉素、氧氟沙星、四环素、多黏菌素E的耐药率依次为95.5%、79.1%、60%、81.8%、77.3%、75.5%、98.2%、70.9%;猪源产ESBL大肠杆菌对阿莫西林、四环素、多黏菌素E有较高的耐药率,分别为76.1%、94.6%、54.3%,其他抗菌药物耐药率在1.1%~43.5%之间;牛源产ESBL大肠杆菌整体耐药率不高,对四环素和多黏菌素E耐药率分别为50%和51.7%。整体而言,不同动物源产ESBL耐药情况呈现:鸡源>猪源>牛源,且多药耐药严重。
  3.不同动物源产ESBL大肠杆菌耐药基因检测:对产ESBL大肠杆菌进行6种与β-内酰胺类抗菌药物相关的耐药基因检测,检出了6种基因blaTEM(99.62%)、blaOXA-2(1.6%)、blaCTX(34.23%)、blaSHV(2.69%)、blaOXA-10(19.5%)、blaNDM(3.08%),存在基因共存现象。
  4.不同动物源产ESBL大肠杆菌的PFGE(Pulsed Field Gel Electrophoresis)和MLST(Multilocus Sequence Typing)检测:不同动物源产ESBL大肠杆菌的PFGE结果表明,37株菌存在30种PFGE带型,同源性≥90%的有16株大肠杆菌,且存在不同来源拥有相同谱型;MLST结果显示44株菌分为22个序列类型(ST),分别是ST48(n=5),ST189(n=5),ST206(n=4),ST6396(n=3),ST10(n=3)和ST155(n=3)。
  我国不同动物源产ESBL大肠杆菌分离率较高,鸡源>猪源>牛源。本试验中鸡源产ESBL大肠杆菌耐药情况严重于猪源和牛源。不同动物源检出的6种耐药基因种类和检出率存在差异,其中鸡源产ESBL大肠杆菌要高于猪源和牛源。同源性达90%以上的菌株分布于不同动物源,说明存在优势耐药菌株广泛传播;同时ST48型在三种动物源中均有发现,可能成为流行的ST型。建议相关部门针对不同动物源产ESBL大肠杆菌进行耐药及流行病学调查,进而降低产ESBL菌株所引发的耐药风险。
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