乳腺癌（Breast Cancer,BC）已成为全球女性最普遍的癌症之一,也是女性死亡的主要原因。雌激素受体阳性（ER+）乳腺癌是最常见的乳腺癌类型。内分泌治疗是目前治疗ER+乳腺癌患者最有效的方法,但仍有很多患者复发并产生耐药性,而在大多数耐药性病例中,肿瘤生长和疾病进展仍然依赖ERα信号传导,因此靶向ERα的治疗仍然是ER+乳腺癌最主要的治疗方案。PHF19（PHD finger protein 19）,又称 PCL3（Polycomb-like 3）,是多梳抑制复合物2（Polycomb Repressive Complex 2,PRC2）的组成部分,可以识别并结合 H3K36me3,招募H3K36me3脱甲基酶NO66,激活PRC2复合物组蛋白甲基转移酶的催化活性,从而增加H3K27me3的富集,促进染色质凝集并介导转录抑制。高表达PHF19可以促进多种癌症的进展,如肝癌、前列腺癌、结直肠癌等,然而到目前为止还缺乏关于PHF19在乳腺癌进展中的报道。通过数据分析发现PHF19在乳腺癌中表达上调并且PHF19高表达与乳腺癌患者不良预后相关,预示PHF19可能与乳腺癌进展有密切的关系,因此,阐明PHF19在乳腺癌中的作用及其分子机制,可能为乳腺癌的预防和治疗提供新的策略。研究目的:1、探究PHF19与乳腺癌进展的关系;2、验证PHF19与雌激素受体的关系;3、揭示PHF19在乳腺癌进展中发挥作用的机制。研究方法:1、使用TCGA数据库,分析PHF19在乳腺癌中的表达情况,并通过RT-qPCR和Western blot检测乳腺癌细胞系中PHF19表达量;2、使用CCK-8、EdU、流式细胞术等实验,检测PHF19对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响;3、在乳腺癌细胞系中敲低PHF19,进行RNA-seq,对测序结果进行表达差异和功能富集分析;4、在乳腺癌细胞中敲低PHF19,通过Q-PCR、Western blot检测PHF19对ERα的调控作用;5、敲低PHF19并过表达ERα,拯救实验检测乳腺癌细胞增殖能力的变化;6、通过ChIP和Co-IP检测PHF19在转录水平和蛋白水平上对ERα的调控情况;7、在MCF-7细胞中,使用蛋白合成抑制剂CHX和蛋白酶体抑制剂MG132分别处理对照组和敲低PHF19的细胞,通过Western blot检测PHF19对ERα蛋白质稳定性的调控作用;8、在乳腺癌细胞中敲低 PHF19,转入 pcDNA3.1-ERα-3×Flag 和 pcDNA3.1-Ub-HA质粒并用MG132处理细胞6h,Western blot检测ERα蛋白多聚泛素化水平的变化;9、通过RT-qPCR、Western blot、ChIP检测PHF19对CUL4B的调控作用,并通过Co-IP检测ERα与CUL4B的相互作用情况;10、在乳腺癌细胞中敲低PHF19和CUL4B,拯救实验检测乳腺癌细胞增殖能力和ERα蛋白水平的变化。研究结果:1、PHF19在乳腺癌中高表达并与乳腺癌患者总生存率呈负相关;2、敲低PHF19抑制乳腺癌细胞增殖并促进凋亡;3、PHF19与ERα表达水平呈正相关;4、过表达ERα可以拯救敲低PHF19引起的增殖能力的下调;5、PHF19通过泛素-蛋白酶体途径调控ERα;6、PHF19通过调控CUL4B影响ERα的蛋白稳定性。结论:1、PHF19在乳腺癌中高表达并与乳腺癌患者总生存率呈负相关,敲低PHF19可以抑制乳腺癌细胞增殖并促进其凋亡。2、PHF19通过正向调控ERα的表达进而影响乳腺癌细胞增殖能力。3、PHF19通过调控CUL4B E3泛素连接酶体进而影响ERα的蛋白稳定性。