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研究背景胸腔积液是一种常见的临床征象,常见的有结核性和恶性胸腔积液,二者都是以淋巴细胞增高为主。国内外众多研究证实恶性胸腔积液微环境处于免疫抑制状态。作为细胞免疫中主要作用细胞的细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T Lymphocyte, CTL),其表达的穿孔素(Perforin, pore-forming protein, PFP)在细胞杀伤和启动细胞凋亡中起主要作用。细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 (cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4, CTLA-4)是一种重要的参与下调T细胞功能的共刺激分子,阻断其与B7的结合能增强细胞免疫。那么在结核性和恶性胸腔积液中的CTL表达PFP及其表达CTLA-4水平怎么样,与胸腔积液微环境免疫状态的形成关系怎样,值得深入研究,以便进一步阐明胸腔积液微环境免疫状态的形成机制。目的1.探索胸腔积液中淋巴细胞的分类。2.探索胸腔积液中PFP的浓度及CTL的PFP表达水平与免疫状态的关系。3.探索胸腔积液中CTLA-4的浓度及CTL的CTLA-4的表达水平与免疫状态的关系。方法1.标本收集及处理收集武汉大学人民医院呼吸内科2007年9月／2008年6月住院病人的胸腔积液60份(每病人仅收1份),其中癌性30份,结核性30份。所有胸腔积液均在治疗前由胸腔穿刺取得,每份50ml以上,肝素钠抗凝后经200目尼龙网过滤。取5ml过滤后胸腔积液,2000r／min离心10分钟,取上清置于-80℃超低温冰箱冻存。随机各选10份过滤后恶性和结核性胸腔积液50ml,置于50ml离心试管,2000r／min离心10分钟,弃上清,留细胞沉渣备用。2.标本的检测2.1 ELISA检测胸腔积液中Perforin的浓度2.2 ELISA检测胸腔积液中CTLA-4的浓度2.3单个核细胞的分离和标记、流式细胞仪测定结果1.各组患者的年龄、男女比例相比无差异。2.结核性和恶性胸腔积液中有核细胞数及淋巴细胞亚群结果。3.结核性胸液中穿孔素的浓度为9816±673.0pg/ml,恶性胸液中穿孔素的浓度为4755±790.9pg/ml,两组相比P=0.0001,有显著性差异。4.结核性胸液中CTLA-4的浓度为1.885±0.3937ng/ml,恶性胸液中CTLA-4的浓度为5.508±1.343ng/ml,两组相比P=0.0185,有显著性差异。5.结核性胸液中淋巴细胞穿孔素表达率为15.62±1.541%,恶性胸液中淋巴细胞穿孔素表达率为8.010±1.051%,二者相比P=0.0007,有明显统计学差异。6.结核性胸液中淋巴细胞CTLA-4表达率为13.70±1.663%,恶性胸液中淋巴细胞穿孔素表达率为6.400±0.9508%,二者相比P=0.0052,有明显统计学差异。结论1.恶性胸腔积液中perforin浓度较结核性组低。2.恶性胸腔积液中CD3+CD8+T淋巴细胞内perforin的表达较结核组低。3.恶性胸腔积液中sCTLA-4浓度较结核组高。4.恶性胸腔积液中CD3+CD8+T淋巴细胞内CTLA-4的表达较结核组低。5. perforin、CTLA-4与微环境免疫状态密切相关,检测perforin、ctla-4的表达和二者的浓度有助于判断免疫状态；可能有助于鉴别良恶性胸腔积液。6.用积液相关淋巴细胞中细胞毒性T淋巴细胞来研究肿瘤导致的免疫抑制状态切实可行。