论文部分内容阅读
平卧菊三七是一种新资源食品,具有很多功效。本实验主要从其有效成分的提取以及生物活性方面进行研究,初步探讨其抗菌、抗氧化和抗癌作用。实验方法和结果如下:(1)响应面法优化超声提取平卧菊三七中黄酮类化合物的工艺,得到最佳的提取条件为:提取温度63°C,提取时间48min,乙醇浓度54%,超声功率112W,在此条件下,总黄酮理论预测提取率为4.17%。(2)根据吸附量和解析率分析,从8种大孔树脂中选出HPD500作为后续纯化树脂。通过单因素实验得到黄酮纯化的最优条件为:上样液p H=6,上样液体积25BV,上样液质量浓度1mg/m L,常温下吸附,50%乙醇溶液洗脱,洗脱速度1m L/min,洗脱体积6BV。(3)萃取层上大孔树脂柱后,分别用10%、30%、50%、70%、90%乙醇溶液梯度洗脱,各洗脱液总黄酮含量如下:30%乙醇洗脱正丁醇层大孔树脂柱(30%EBR)为74.01%、50%乙醇洗脱正丁醇层大孔树脂柱(50%EBR)为62.64%、50%乙醇洗脱乙酸乙酯层大孔树脂柱(50%EER)为82.04%、70%乙醇洗脱乙酸乙酯层大孔树脂柱(70%EER)为72.60%、90%乙醇洗脱石油醚层大孔树脂柱(90%EPR)为13.14%、90%乙醇洗脱萃取水层大孔树脂柱(90%EWR)为10.14%,10%乙醇洗脱液中黄酮含量很少。(4)采用滤纸片法检测各洗脱液抗菌活性。结果显示:抑菌强度与总黄酮含量呈正相关,其中50%EER对细菌的抑制效果最好。各洗脱液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具良好的抑制效果,对霉菌无抑制。供试物抗菌活性大小为:50%EER>30%EBR>70%EER>50%EBR。(5)各洗脱液体外抗氧化活性研究,考察其对DPPH自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O2–)的清除能力以及还原力大小。实验结果显示:各洗脱液的抗氧化能力与总黄酮含量呈正相关,其抗氧化力顺序依次为:50%EER>30%EBR>50%EBR>90%EWR。(6)体外测定各洗脱液抗Caco-2结肠癌细胞的能力。分别用0.125、0.25、0.5、1.0mg/m L浓度的药物去干预癌细胞,MTT实验发现各物质均有一定的抗癌效果,且与总黄酮的含量呈正相关。0.5 mg/m L的药物浓度干预可以达到最好的抑癌效果90%左右。各洗脱液抗癌能力大小依次为:50%EER>70%EER>30%EBR>50%EBR>90%EPR。Western blot检测了促凋亡基因Cas3和Bax以及抑凋亡基因Bcl-2的蛋白表达情况,Cas3和Bax的表达呈上升趋势而Bcl-2呈下降趋势。说明平卧菊三七各洗脱液通过调节结肠癌细胞中的相关凋亡蛋白的表达,来调控细胞的凋亡。