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研究背景:宫颈癌是女性最常见的癌症之一,世界范围内每年大约有50万新发病例,28万患者死于该病,在不发达地区,其发病率与死亡率均位于女性生殖系统肿瘤的第二位。宫颈癌的局部浸润及远处转移,是导致患者手术切除、放化疗治疗疗效不佳及预后较差的主要原因,同时我国HPV疫苗普及程度尚不够全面,因此寻找新的治疗靶点来优化宫颈癌的治疗效果成为了一个亟待解决的问题。LKB1作为一种被公认的抑癌基因,其在宫颈癌中的突变率高达20%,并且LKB1的失活与宫颈癌的不良预后显著相关。目前对LKB1在肿瘤发生、发展过程中的研究多集中于LKB1通过磷酸化激活其底物腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）从而发挥抗肿瘤作用。肿瘤的代谢改变包括葡萄糖、脂质及谷氨酰胺等物质的代谢异常,其中脂质作为细胞能量主要储存形式及生物膜重要构成成分的,其代谢的改变对肿瘤进程的影响,近年来被广泛研究。有研究表明脂肪酸合成的增加是肿瘤细胞一种重要代谢表型,其中重要的调控因子固醇调节原件结合蛋白1（Sterol regulatory element binding protein-1,SREBP1）可调节内源性脂肪酸的从头合成,在胰腺癌、前列腺癌及肝细胞癌等多种恶性肿瘤中可检测到其表达增加。然而在宫颈癌中LKB1是否可以通过调节脂肪酸合成影响肿瘤的进展,以及SREBP1在其中发挥着怎样的作用,尚未见报道。研究目的:本研究旨在观察LKB1与宫颈癌发展及预后的关系,探讨LKB1是否可以通过SREBP1调节脂肪酸合成,影响宫颈癌细胞迁移、侵袭,为寻找宫颈癌治疗的新靶点提供理论依据。研究方法:1.LKB1表达与宫颈癌的关系（1）通过对临床宫颈锥切术获得的21例宫颈组织（包括5例宫颈炎、6例宫颈鳞状上皮内病变以及10例宫颈癌）进行免疫组织化学染色,观察在宫颈不同病变中LKB1的表达情况;（2）利用生物信息学网站http://www.cbioportal.org对于TCGA数据库中宫颈癌患者LKB1的表达情况进行检索,探究LKB1表达情况与宫颈癌患者总生存期（Overall Survival,OS）和无疾病生存期（Disease-Free Survival,DFS）的相关性。（3）采用LKB1缺失的宫颈癌细胞系He La与表达He La-GFP-LKB1质粒的稳转He La细胞株He La-LKB1进行细胞学实验。通过划痕实验观察LKB1表达对He La细胞迁移能力的影响;通过Transwell小室侵袭实验观察LKB1表达对He La细胞侵袭能力的影响。2.LKB1对宫颈癌细胞脂肪酸合成的调节作用（1）通过油红O染色、尼罗红染色检测LKB1表达对He La细胞内脂质积累的影响;（2）通过Western Blot实验检测LKB1表达对其下游靶蛋白AMPK的激活,以及对SREBP1表达的影响;通过免疫组织化学染色检测宫颈癌患者组织中LKB1与SREBP1表达的相关性;3.SREBP1抑制剂抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭使用SREBP1的特异性抑制剂法图他汀（fatostatin）来抑制SREBP1活性形式的表达,探究法图他汀对宫颈癌细胞迁移和侵袭能力的抑制效果。（1）通过CCK-8细胞增殖-毒性实验检测并计算出法图他汀对He La细胞增殖能力的抑制率,以及IC50值;（2）通过Western Blot及RT-q PCR实验检测法图他汀对He La细胞内SREBP1蛋白及m RNA表达水平的影响,以及对SREBP1下游脂肪酸合成相关靶蛋白m RNA表达的调控;（3）通过油红O染色和尼罗红染色检测法图他汀对宫颈癌细胞内脂质积累的影响;（4）通过划痕实验和Transwell侵袭实验观察法图他汀对宫颈癌细胞迁移和侵袭能力的影响。研究结果:1.LKB1表达与宫颈癌的关系（1）免疫组织化学染色结果显示,与宫颈炎患者相比,宫颈癌患者宫颈组织中LKB1表达水平降低（P<0.05）;宫颈鳞状上皮内病变患者宫颈组织中LKB1表达情况与宫颈炎患者相比无显著差异;（2）生物信息学网站检索结果显示,LKB1发生突变时,宫颈癌患者总生存期显著缩短（P=0.0173）,无疾病生存期显著缩短（P<0.001）。（3）划痕实验结果显示,与He La细胞相比,LKB1过表达后细胞迁移率显著降低（P<0.001）;Transwell侵袭实验结果显示,LKB1过表达的He La细胞48小时后穿过基底膜的细胞数显著减少（P<0.001）。2.LKB1对宫颈癌细胞脂肪酸合成的调节作用（1）油红O染色结果显示,与He La细胞相比,He La-LKB1细胞胞质中累积的红色脂滴相对含量降低（P<0.01）;尼罗红染色检测结果显示,LKB1过表达的He La-LKB1细胞红色荧光强度显著减弱（P<0.001）;（2）Western Blot结果显示,在宫颈癌细胞中LKB1过表达可磷酸化激活AMPK,p-AMPK表达上调,而SREBP1表达水平显著降低（P<0.001）;免疫组织化学染色结果显示,在宫颈癌患者宫颈组织中LKB1高表达时SREBP1呈低表达;相反当LKB1低表达时SREBP1呈高表达。3.SREBP1抑制剂抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭（1）CCK-8细胞增殖-毒性实验结果显示,随着法图他汀浓度的增高,其对He La细胞活力的抑制率逐渐增加,法图他汀对He La细胞作用的IC50值为12.56μmol;（2）Western Blot结果显示,法图他汀作用于He La细胞48小时后,SREBP1的蛋白表达水平显著下降（P<0.001）;同时RT-q PCR实验结果显示,法图他汀作用48小时后He La细胞内SREBP1及其下游脂肪酸合成相关酶FASN、ACLY的m RNA表达水平显著降低（P<0.001）;在使用法图他汀处理LKB1过表达的He La-LKB1细胞时,SREBP1蛋白、m RNA水平,以及FASN、ACLY m RNA表达水平的降低更为显著（P<0.001）;（3）油红O染色结果显示,法图他汀处理48小时后,He La细胞胞质中累积的红色脂滴相对含量显著降低（P<0.001）;尼罗红染色检测结果显示,同样处理条件下,He La细胞红色荧光强度显著减弱（P<0.001）;同样,LKB1过表达的He La-LKB1细胞在法图他汀处理条件下,细胞质内红色脂滴相对含量进一步降低、细胞红色荧光强度进一步减弱（P<0.001）;（4）划痕实验结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,法图他汀处理48小时后,He La细胞迁移率显著降低（P<0.001）;Transwell侵袭实验结果显示,法图他汀处理48小时后,He La细胞穿过基底膜的细胞数显著减少（P<0.001）;使用法图他汀处理LKB1过表达的He La-LKB1细胞48小时后,细胞迁移率与穿过基底膜的细胞数进一步降低（P<0.001）。研究结论:1.LKB1在宫颈癌中表达缺失,与宫颈癌发展及不良预后相关。2.LKB1可以通过磷酸化激活AMPK抑制SREBP1表达,抑制宫颈癌细胞脂肪酸合成的能力。3.法图他汀可协同LKB1过表达,通过调节脂肪酸合成,抑制宫颈癌细胞的迁移、侵袭。