前B细胞集落增强因子(Pre-B-cell colony-enhancing factor,PBEF)是近来在内脏脂肪组织中发现的一类高表达的细胞因子,也被命名为内脏脂肪素(Visfatin)。PBEF广泛的分布在各种内脏组织中,尤其在肝脏、肺、心脏、脑、肾脏、脂肪、胎膜等组织中高度表达并发挥着重要的作用。　　 研究认为机械应力与炎症损伤被认为是急性肺损伤的病理基础,能增加肺部的通透性和易感性,通过上调PBEF蛋白质的表达,导致PBEF的表达升高,影响凝血酶诱导减少人肺血管内皮细胞屏障功能,增加细胞骨架重排,促进炎症细胞因子IL-8等的分泌;同时,也有研究显示,PBEF在犬、鼠等动物模型以及人急性肺损伤的肺组织中高表达,并且在支气管肺泡灌洗液和血清中有显著的增加,实验结果表明PBEF可能是急性肺损伤的一种新的诊断标识。　　 国内外的研究资料显示:PBEF作为一种内源性炎症因子[11,12]介导细胞免疫,其在肺结核发病机理中的作用不容忽视。PBEF在慢性炎症性疾病的发病机制中具有重要的作用。肺结核是由结核分枝杆菌(MTB)感染的,导致机体细胞免疫功能下降的一种慢性呼吸道传染病,细胞免疫和相关免疫因子的作用是结核病发生发展的重要机制。目前国内外关于PBEF在动物肺结核模型中的作用研究尚未见报道。　　 本实验利用分子生物学技术构建原核表达载体PET28a-PBEF;将重组载体PET28a-PBEF转化到大肠杆菌E.coliBL-21表达菌株中,以IPTG诱导表达PBEF目的蛋白,对所得的样品进行SOS-PAGE电泳;再利用Ni2+亲合柱对PBEF目的蛋白进行纯化;将纯化后的目的蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体;ELISA法检测兔抗PBEF血清的效价,Westernblot检测到抗体特异性:以制备的PBEF多克隆抗体为工具,检测小鼠肺结核模型肺组织中PBEF基因和总蛋白的表达。　　 实验结果如下:　　 1.诱导目的蛋白表达,在52KD位置有PBEF目的蛋白的条带显示,并且是以包涵体形式表达。　　 2.Ni2+亲合柱对PBEF目的蛋白进行纯化后考马斯亮蓝法测得最终所得蛋白质含量为5mg/ml。　　 3.将纯化的蛋白作为抗原免疫家兔,得到效价为1:6400,抗体特异性也很好。　　 4.利用所得抗体检测,表明小鼠肺结核模型的肺组织中,PBEF基因和蛋白的表达水平都升高。　　 研究结果为阐明肺结核的发病机制以及进一步探讨PBEF在肺结核病中的作用奠定实验基础。