论文部分内容阅读
目的:
胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其发生是由多基因共同作用的多步骤、多阶段的复杂过程,其中信号转导子和转录激活子(Signal transducers and activators of transcription,STATs)信号通路在胃癌的发生中发挥着重要作用。信号传导子与转录激活子3(Signal transducers and activators of transcription3,STAT3)是STAT家族的重要一员,它是一种存在于细胞浆中与酪氨酸磷酸化信号通道相偶联的双功能蛋白,并与肿瘤的增殖、凋亡、侵袭、转移、血管生成和免疫逃逸等密切相关,被看作是肿瘤治疗的潜在靶点。
本研究构建针对STAT3的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体STAT3-siRNA,研究siRNA干扰STAT3基因表达后对人胃癌细胞株MGC-803(p53野生型)和HGC-27(p53突变型)细胞增殖和凋亡的影响。
方法:
1.设计并合成两个STAT3-siRNA片段,经脂质体介导分别转染胃癌细胞株MGC-803和HGC-27。
2.RT-PCR和Westernblot检测转染后胃癌细胞株MGC-803和HGC-27中STAT3mRNA和蛋白的表达。
3.MTT法检测STAT3-siRNA对MGC-803和HGC-27细胞增殖作用的影响。
4.Westernblot检测STAT3-siRNA对MGC-803和HGC-27细胞凋亡作用的影响。
结果:
1.酶切鉴定、紫外分光光度计检测及测序鉴定均证实STAT3-siRNA1和STAT3-siRNA2表达载体构建成功。
2.RT-PCR和Westernblot结果显示,转染后两株细胞中STAT3mRNA和蛋白的表达量均下降,与空白对照组及si-NC转染对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05),其中均以STAT3-siRNA1干扰效果更明显。
3.MTT结果显示,与si-NC转染对照组相比,转染STAT3-siRNA1后,两株细胞的增殖能力均明显下降。
4.Westernblot结果显示,RNA干扰下调MGC-803和HGC-27细胞中STAT3表达后,影响凋亡相关因子的表达,转染STAT3-siRNA1后,MGC-803(p53野生型)中乙酰化p53、caspase3表达上调,p-STAT3、bcl-2及survivin表达下调,与si-NC转染对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),bax表达变化不明显,与si-NC转染对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);HGC-27(p53突变型)中乙酰化p53表达上调,p-STAT3、bcl-2及survivin表达下调,与si-NC转染对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);bax、caspase3表达变化不明显,与si-NC转染对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:
1.本研究构建的STAT3-siRNA表达载体可有效抑制STAT3在胃癌细胞株MGC-803和HGC-27中的表达。
2.siRNA干扰沉默STAT3在MGC-803和HGC-27胃癌细胞中的表达后可抑制胃癌细胞的增殖,促进胃癌细胞的凋亡,提示STAT3可能是胃癌治疗的潜在靶点之一。
3.siRNA干扰沉默STAT3在MGC-803和HGC-27胃癌细胞中的表达后,MGC-803(p53野生型)中乙酰化p53、caspase3表达上调,p-STAT3、bcl-2及survivin表达下调,bax表达变化不明显;HGC-27(p53突变型)中乙酰化p53表达上调,p-STAT3、bcl-2及survivin表达下调,bax、caspase3表达变化不明显。表明在p53野生型细胞株中,STAT3可通过调节p53基因的表达进而调节细胞凋亡;而对p53突变型细胞株不具备上述调节作用。