高速逆流色谱分离研究吴茱萸、肾蕨的药用化学成分

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高速逆流色谱法(High-speed counter-current chromatography)是色谱分离法的一个分支,简称HSCCC,起源于多极液-液萃取,在上世纪80年代迅速发展,近年来被广泛地用于分离与制备天然产物。吴茱萸是传统中药,为芸香科吴茱萸属植物,目前已有大量对吴茱萸化学成分的研究报道,而生物碱则是吴茱萸中的主要的活性成分。蕨类植物肾蕨,以其全草或块茎入药,目前对其药用价值的研究尚处于起步的阶段。本论文运用HSCCC研究了上述植物材料的化学成分,对分离产物进行了结构鉴定,并探究了部分分离产物与牛血清蛋白(BSA)的亲和力。实验主要研究结果如下:(1)使用反复重结晶方法从吴茱萸果实(0.5 kg)的乙醇提取物中快速分离得到了5440 mg吴茱萸碱与160 mg吴茱萸次碱,此方法操作简便,效率高,可代替前人使用柱色谱制备分离这两种吲哚类生物碱的技术。(2)应用高速逆流色谱法从0.5 kg吴茱萸果实的乙醇提取物中分离得到了7种喹啉类生物碱,分别为:1-methyl-2((6Z,9Z)-pentadecadienyl)-4(1H)-quinolone(1,8.4 mg),dihydroevocarpine(2,27.0 mg),1-methyl-2-pentadecyl-4(1H)-quinolone(3,18.8 mg),1-methyl-2-undecylquinolin-4(1H)-one(4,13.7 mg),(Z)-1-methyl-2-(tridec-5-en-1-yl)quinolin-4(1H)-one(5,14.0 mg),(Z)-1-methyl-2-(undec-6-en-1-yl)quinolin-4(1H)-one和(Z)-1-methyl-2-(undec-5-en-1-yl)quinolin-4(1H)-one的同分异构混合物(6a和6b,8.3 mg),1-methyl-2-nonylquinolin-4(1H)-one(7,15.1 mg).这些化合物与BSA亲和力的实验表明,吴茱萸喹啉碱碳链上的不饱和双键可以增强吴茱萸喹啉碱与BSA的结合能力,碳链过长或过短都不利于喹啉碱与BSA的结合。(3)采用DPPH和ABTS自由基清除实验证明了肾蕨乙醇提取物具备较好的抗氧化活性,用高速逆流色谱仪从12 kg肾蕨乙醇提取物的乙酸乙酯部位中一次分离得到4个化合物,分别为3,4-二羟基苯甲醛、3,4-二羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯丙烯酸,另一化合物结构有待结构鉴定,试验证明肾蕨富含酚酸类化合物。
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