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目的:本文以蕨麻为研究对象,建立用于测定蕨麻药材中野蔷薇苷和刺梨苷含量的HPLC-ELSD测定方法,并对野蔷薇苷在大鼠体内的药代动力学性质进行初步研究。方法:1.利用D101型大孔吸附树脂对蕨麻醇提物的30%乙醇溶液进行分段,依次用蒸馏水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇作为流动相洗脱,分别得到水馏分、30%乙醇馏分、70%乙醇馏分和95%乙醇馏分。利用开放硅胶色谱柱、ODS反相色谱及制备型RP-HPLC,对70%乙醇馏分中的化合物进行分离纯化和分析,为药代动力学实验所需的野蔷薇苷积累原料。2.建立蕨麻药材中野蔷薇苷和刺梨苷含量的RP-HPCL-ELSD检测方法,并对其进行方法学确证。采用该方法测定购自青海西宁、青海玉树、云南大理、云南楚雄、西藏那曲、四川康定、甘肃甘南等地的不同品级共12个蕨麻样品中野蔷薇苷和刺梨苷的含量。3.建立大鼠血浆中野蔷薇苷含量SPE-HPLC-ESI-MS测定方法,并进行方法学确证。采用该方法对大鼠口服野蔷薇苷后血浆药物浓度变化进行检测和初步药代动力学拟合。结果:1.本实验采用D101大孔树脂对蕨麻醇提物的30%乙醇溶液进行分段,继而利用开放硅胶色谱柱、ODS反向色谱及制备型RP-HPLC对70%乙醇馏分中的化合物进行分离纯化,快速分离得到并积累了野蔷薇苷(纯度>98%,产率0.33‰)、刺梨苷(纯度>95%,产率0.16‰)、蔷薇酸(纯度>95%,产率0.014‰)和委陵菜酸(纯度>95%,产率0.10‰)四种三萜类化合物。2.本实验使用HPLC-ELSD建立了用于测定蕨麻药材中野蔷薇苷和刺梨苷含量的分析方法,野蔷薇苷和刺梨苷的线性范围分别为34.80~754.00μg/ml和34.23~741.65μg/ml,r2分别为0.9981和0.9992,线性关系良好。日内日间精密度(野蔷薇苷<2.36%,刺梨苷<6.12%,RSD%),加样回收率(野蔷薇苷97.57%,刺梨苷99.16%),稳定性(野蔷薇苷<1.24%,刺梨苷<3.40%,RSD%)均符合GPH5-1《化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》的规定,并运用该方法测定了12个蕨麻样品中的野蔷薇苷和刺梨苷含量。3.本实验建立了测定大鼠血浆内野蔷薇苷含量的SPE-HPLC-ESI-MS方法,该方法线性范围5~500 ng/ml,标准曲线相关系数r2=0.9990,线性关系良好,日内日间精密度RSD<7.69%,准确度RE<5.34%,稳定性RE<13.41%,回收率(LQC91.0±10.3%,MQC 87.7±5.1%,HQC 84.0±4.5%,and IS 85.4±4.4%)和基质效应(LQC 111.9±7.4%,MQC 88.9±2.9%,HQC 88.9±2.1%,and IS 101.4±3.8%)符合EMEA关于生物样品分析方法学验证的指导原则的规定。采用该方法测定了口服给药后大鼠血浆内野蔷薇苷的药时曲线。结果显示,野蔷薇苷进入大鼠体内后,吸收迅速,达峰时间为0.2 h,口服剂量为60mg/kg时,最大血药浓度仅为332.81 ng/ml。半衰期为7.97 h,在大约4 h处出现双峰现象。结论:1.本研究建立的HPLC-ELSD法测定蕨麻药材中的野蔷薇苷和刺梨苷含量的方法简单、准确高效。蕨麻中野蔷薇苷和刺梨苷的含量与产地的平均海拔高度和产品的品级高低有关。产自青藏高原各产地的蕨麻中野蔷薇苷和刺梨苷的含量比其他产地的蕨麻高;相同产地的不同品级蕨麻,品级越低者,野蔷薇苷和刺梨苷的含量越高。2.本研究建立的测定大鼠血浆内野蔷薇苷含量的方法简单、准确、稳定、可靠,口服给药后,野蔷薇苷在大鼠体内迅速吸收,但最大血药浓度较低,提示野蔷薇苷的细胞膜通透性不佳。药时曲线出现双峰,提示存在肝肠循环。