论文部分内容阅读
Rhomboid蛋白酶与癌症的发生和预后有密切关系。RHBDD1是本研究组在生精细胞基因表达差异研究中发现的一个Rhomboid家族新成员，在睾丸中高水平表达，它能切割Bcl-2家族促凋亡分子BIK，进而调控BIK介导的凋亡过程。RHBDD1参与调控结直肠癌细胞的生长和凋亡。 做为恶性癌症之一，乳腺癌具有异质性和致死率高的特征，而且目前尚没有针对乳腺癌抗药性的有效分子标记物。因此对RHBDD1在乳腺癌中如何发挥生物学功能调控乳腺癌细胞恶性表型及其分子机制进行深入研究。 利用组织微阵列联合免疫组织化学技术检测了116例乳腺癌组织和39例对应临近癌旁组织内RHBDD1的表达情况;还检测了84例乳腺癌组织内RHBDD1、p-Akt和CDK2的表达情况。选取了三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和ER阳性乳腺癌细胞MCF7，使用CRISPR/Cas9基因改造系统，将乳腺癌细胞的RHBDD1敲除，在体外水平观察RHBDD1对乳腺癌细胞恶性表型的影响。体外实验包括:生长曲线、集落形成、迁移和侵袭实验、划痕实验;还用荧光显微技术结合TUNEL实验、流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期分布。使用RNA测序和蛋白质免疫印记技术检测RHBDD1在乳腺癌细胞内发挥功能的分子机制。在动物体内水平实验中，将野生型和RHBDD1敲除型的MDA-MB-231细胞注射到裸鼠皮下，定期测量皮下瘤的生长情况。 RHBDD1在乳腺癌组织中的表达量显著高于癌旁组织(p=1.566e-12);将免疫组织化学评分大于、等于5定为RHBDD1高表达，大于0、小于5定为RHBDD1低表达。在116个样品中，有94/116的乳腺癌是RHBDD1高表达，所占比例为81％;只有11/39的癌旁组织是RHBDD1高表达，所占比例为28％。RHBDD1的高表达与病理学TNM分期(p=0.01474)和ER表达量(p=0.04679)相关。 体外实验结果表明，RHBDD1敲除能够促进乳腺癌细胞凋亡，抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。RHBDD1敲除导致p-Akt和CDK2的表达量均显著下降，细胞周期进程和G1/S期转变受到抑制。动物体内水平实验证明，RHBDD1缺失能够抑制裸鼠皮下肿瘤的生长。 用Spearman相关性配对检验分析了84例乳腺癌组织内RHBDD1、p-Akt和CDK2的表达，发现RHBDD1和p-Akt的表达显著正相关(ρ=0.437; p=3.245e-05)，RHBDD1和CDK2的表达显著正相关(ρ=0.386; p=0.0003)。 综上所述，RHBDD1能够调控乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和细胞周期等恶性表型;RHBDD1在乳腺癌组织中高表达，并与病理学TNM分期和ER表达量相关、与p-Akt和CDK2的表达量显著正相关。