大鼠脑缺血再灌注后HSP20和Bcl-2的表达及丹红注射液干预的影响

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目的:检测SD大鼠脑缺血再灌注中小热休克蛋白20(heat shock protein HSP20)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2, Bcl-2)在脑组织中的动态变化,分析二者之间可能的关系,探讨其在脑缺血再灌注中的作用。研究丹红注射液对SD大鼠脑缺血再灌注中HSP20、Bcl-2的影响,阐明丹红注射液可能的机制。方法:将250g-320g雄性健康SD大鼠60只,随机划分成四组:正常对照组(normal group)(n=10),假手术组(sham-operated group)(n=10)(?)口脑缺血再灌注组(I/R group)(n=20),丹红注射液药物干预组(n=20)。应用Longa法建立SD大鼠大脑中动脉缺血两小时再灌注模型,其中IR组和药物干预组又分为四个亚组,每个亚组5只动物,分别是:6小时组、1天组、3天组、7天组。按Bedersonl的5级评分法来评价手术后SD大鼠的神经功能缺损。应用HE染色法观察大鼠脑组织病理学变化情况;应用免疫组织化学法来检测Bcl-2、HSP20的阳性细胞表达水平的动态变化;应用实时荧光定量PCR方法对标本中HSP20mRNA的表达及扩增倍数进行测定。结果:1.HE染色:假手术组和正常对照组可见SD大鼠脑组织中神经元结构及形态正常、无间质水肿、没有明显的梗塞灶。脑缺血再灌注组可见神经元细胞坏死产生,随着时间的推移病灶侧神经元坏死变性现象加重并伴有胶质细胞增生。而在药物干预组和IR组各个相同时间点的亚组相比较,可以看出药物干预组大鼠脑组织损伤程度明显轻于缺血再灌注组。2.免疫组织化学结果:(1)HSP20在假手术组和正常组的个时间点偶见阳性细胞,两组比较无统计学意义(P>0.05)。在脑缺血再灌注6h组中HSP20的表达有所升高,3d时到达高峰,之后呈逐渐下降趋势,7d组阳性细胞数较3d组也有明显减少,但仍高于假手术组和正常组。表达主要位于海马区的神经元、神经胶质细胞胞浆中及血管内皮细胞。IR组与假手术组及正常对照组比较HSP20的表达有差异,其差异有统计学意义(P<0.01);(2)Bcl-2在假手术组和正常组中偶可见阳性细胞,两组比较无统计学意义(P>0.05);Bcl-2在脑缺血再灌注6h组中表达开始升高,并迅速升高在1d时达到高峰,之后随着时间的推移逐渐下降,7d组阳性细胞数较3d组也有明显减少,但依然比假手术组及正常组高;Bcl-2阳性细胞数在IR组与假手术组的比较中有差异,且其差异有统计学意义(P<0.01);(3)丹红药物干预组中,HSP20的表达趋势与IR组基本相同,但阳性细胞数明显高于IR组,且其差异有统计学意义(P<0.05)。丹红药物干预组与脑缺血再灌注组中Bcl-2的表达趋势基本相同,但阳性细胞数却明显高于IR组,并且差异有统计学意义(P<0.05)。3.RT-PCR检测结果:在脑缺血再灌注组中HSP20mRNA在6h时开始升高,3d时达到最高,之后逐渐降低但7d组仍高于正常对照组及假手术组,与正常组和假手术组比较有统计学意义(P<0.05)。在丹红药物干预组中HSP20mRNA的表达趋势与IR组基本相同,同样在6h时开始升高,3d时达到最高后开始缓慢下降,但HSP20mRNA表达量却明显高于IR组,且其差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.脑缺血再灌注后HSP20、Bcl-2表达均升高2.丹红注射液可以上调HSP20和Bcl-2的表达,并且可能有神经保护作用
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