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星状病毒(Astrovirus)是一类宿主众多的RNA病毒,常见症状为腹泻,除此之外还有神经症状、呼吸症状、肝炎、肾炎、肠叠套等。多项研究表明星状病毒易发生跨物种的传播和基因重组,该病毒已成为一种潜在的人畜共患病原。猪星状病毒(Porcine astrovirus,PAstV)共分为5个基因型,虽然各个地区流行的基因型不尽相同,但都具有较高的感染率,并且存在多种基因型共同感染的现象。然而目前关于猪星状病毒检测技术及预防手段的研究仍较少。本研究对河北地区一株猪星状病毒进行了遗传进化分析,并建立了检测猪星状病毒4型的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR方法和间接ELISA检测方法,对河北地区猪星状病毒的基因结构和流行情况进行了初步的调查。另一方面本研究初步构建了可用作核酸疫苗的真核表达载体并进行了免疫原性研究,为以后的猪星状病毒疫苗研究工作奠定了基础。本研究从河北地区的猪腹泻病料样品中检测到一株猪星状病毒,并命名为PAstV4 CH-HB-SJZ。随后设计引物进行基因序列的扩增并进行了进化树分析及同源性分析。试验中成功扩增出6733 nt的病毒序列,包括全部病毒CDS片段和5’UTR,以及大部分的3’UTR和Poly A尾。核苷酸同源性分析显示CH-HB-SJZ株与25株猪星状病毒的参考序列同源性在41.7%～80.5%之间,与猪星状病毒4型同源性最高(73.1%～80.5%),与其他基因型的猪星状病毒同源性均在50%以下。32株不同种属星状病毒进化树显示,CH-HB-SJZ株与其余8株猪星状病毒4型毒株均在同一分支,其中与WBAstV-1株亲缘关系最近。本研究构建了 pET32a-nsp原核表达重组载体,诱导纯化得到了约37.3 kDa大小的nsp1ab重组蛋白。以该蛋白为包被蛋白成功构建了检测PAstV4nsp1ab蛋白IgG抗体的间接ELISA方法:蛋白包被浓度为1μg/mL,封闭液为5%脱脂牛奶,一抗和二抗稀释度分别为1:500和1:50000,一抗和二抗孵育时间均为1 h,与CSFV,PRRSV,PRV,PEDV,PDCoV无交叉反应,组间组内重复性试验变异系数均在10%以下。通过30份PAstV4阴性血清计算得阴阳性血清临界值为0.323。对河北省2018-2019年300份临床血清进行检测,阳性率为14%(42/300)。以上结果显示,本研究建立的间接ELISA方法可作为临床监测猪星状病毒抗体的技术手段。本研究根据猪星状病毒4型相对保守的ORF1a基因设计引物,建立了猪星状病毒4型SYBRGreen Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法。试验结果显示:本方法最低检测限量为50.3拷贝/μL,具有较好的灵敏度;与CSFV,PRRSV,PRV,PEDV,PDCoV均未发生交叉反应,具有良好的特异性;组内变异系数和组间变异系数均未超过2%,证明本方法具有良好的重复性。临床检测结果显示猪星状病毒4型阳性率为18.6%(8/43)。本研究建立了一种猪星状病毒的荧光定量PCR检测方法,为猪星状病毒的临床检测提供了新的技术手段。本研究成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-ZH。用重组载体对小鼠进行3次免疫并对血清中的IgG抗体进行特异性ELISA检测。结果显示注射pcDNA3.1-ZH组的小鼠血清中抗体含量要明显高于对照组,而且抗体水平随着免疫次数的增加而升高,证明该载体可刺激小鼠免疫产生特异性抗体。