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超瑞利散射(Hyper Rayleigh Scattering,HRS)现象是一种二阶非线性光学现象,常用来测量溶液或气体中分子的一阶超极化率。近年来,HRS技术已经突破了传统的单一非线性光学研究,开始应用于生物探测和传感等领域。表面增强拉曼散射(Surface Enhanced RamanScattering,SERS)技术具有谱线宽度窄,可进行分子指认和可检测极低浓度物质等优点,逐渐成为近年来生物探测领域的研究热点。
本论文首先介绍了超瑞利散射和表面增强拉曼散射的发展和基本原理,综述了基于金属纳米粒子的超瑞利散射技术和表面增强拉曼散射技术的特点及其在免疫检测中的应用。
在此基础上,论文主要进行了以下的研究工作:
首先,基于银纳米粒子,研究了表面增强超瑞利散射现象(SEHRS)的机理。实验上测量了4种有机分子/银纳米粒子混合体系的HRS信号,结果表明化学结构相似的4种有机染料分子在相同的实验条件下对获得的HRS信号增强因子不同,分别为14.0、2.4、1.0和0.95;经分析认为上述现象不仅是由电磁场效应导致的,化学效应也有重要的影响。
其次,对表面增强超瑞利散射在生物免疫检测中的应用进行了探索。在研究了聚集效应对SEFHRS的影响的基础上,对金、银纳米粒子进行了免疫标记,实现了抗原诱导的标记金属纳米粒子的聚集;发现抗原诱导了标记金属纳米粒子的聚集后,HRS信号有下降的趋势。
最后,研究了SERS技术在生物免疫检测中的应用。利用兼具SERS信号和荧光信号的纳米粒子实现了双模式免疫检测。用化学偶联法制备了免疫检测基底;制备了双模式纳米粒子,并进行了抗体修饰;最后通过组建基底上的固相抗体和待测抗原及带有可识别SERS信号和荧光信号的标记抗体形成“三明治”结构,实现了基于SERS、荧光的双模式免疫检测。