海洋无脊椎动物共附生微生物分离及其代谢产物群感效应淬灭的研究

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海洋独特的生态环境与陆地生态环境相比存在着巨大差异,造就了海洋与陆地迥异的生物物种,在新物质需求大而陆地新生物资源日益枯竭的当今,海洋中丰富的生物种类以及其多样的代谢产物给我们提供了新的出路。目前,对珊瑚、海绵、海葵等海洋无脊椎动物的共附生微生物及其代谢产物已有大量研究,但是还没有石磺海牛共附生微生物的相关报道,本文研究了这一具有重要意义的无脊椎动物的共附生微生物及其群感淬灭活性产物。本文对石磺海牛的共附生微生物进行分离纯化和鉴定,共得到214株细菌,分别属于87个种和56个属,并有疑似新菌有15株。其中物种最丰富的是变形菌门,共有125株,最稀有的是浮霉菌门,只有1株。种属结构充分说明了石磺海牛共附生微生物的丰富性和新颖性,具有重要的研究价值。对Flagellimonas菌属菌株XY-359T进行新种鉴定,其16S r RNA序列与标准菌种F.flava DSM22638T相似度最高,为96.5%,进化树显示两者的进化距离也最近,最终将其命名为Flagellimonas onchidii XY-359T。XY-359T为革兰氏阴性菌,杆状,最适生长温度为30℃,最适p H为7.5-8.5,最适盐度为1.5-2.0%,氧化酶和过氧化氢酶呈阳性,能水解吐温20-80。主要极性酯为磷脂酰乙醇胺、氨基脂质、磷酸酯和不能识别的极性酯。主要的脂肪酸为iso-C17:0 3-OH,iso-C15:1 G和iso-C15:0 3-OH,呼吸醌为MK-6。XY-359T的基因组大小为4,207,872 bp,G+C含量为39.1%。多相分类鉴定结果显示,XY-359T为新菌。对共附生细菌的发酵液进行AHL降解活性筛选,一共得到19种具有AHL降解活性的菌株,分别属于15个属,其中7个属目前还没有AHL降解活性报道。对菌株XY-85进行深入研究发现XY-85能产生内酯酶Ahl M,其能降解多种AHL且具有很强的抗逆性。通过全基因组测序分析得到内酯酶Ahl M编码基因,将其克隆到p ET28a载体并转化到Escherichia col i BL21(DE3)表达菌株得到转化子。经过诱导表达和蛋白纯化得到纯的内酯酶Ahl M,该纯化产物与部分AHL信号分子的亲和力比一些已报道的内酯酶高,并在低浓度时能有效抑制植物致病菌Pec生物膜的形成,而转化子能有效抑制Pec的胞外酶分泌和对土豆的致病性。
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